發(fā)布時間：2022-12-22 19:41

　　目的應(yīng)用環(huán)介導(dǎo)等溫擴增技術(shù)（Loop-mediated isothermal amplification, LAMP）建立針對溶藻弧菌gyrB基因的快速檢測方法。方法以溶藻弧菌標(biāo)準(zhǔn)株（ATCC-17749）和溶藻弧菌野生株（WT）為研究對象,通過在線生物學(xué)軟件（http://primerexplorer.jp/e/）設(shè)計針對溶藻弧菌gyrB基因的LAMP引物,利用恒溫水浴進行等溫擴增,優(yōu)化反應(yīng)條件,建立快速檢測方法。結(jié)果①經(jīng)2g/dl凝膠電泳結(jié)果顯示反應(yīng)溫度為61℃時擴增產(chǎn)物成像效果較60℃,62℃和63℃明顯,為適宜反應(yīng)溫度;②在61℃條件下反應(yīng)60 min和90 min凝膠電泳成像效果差異不大,反應(yīng)時間為60 min能滿足擴增需要;③利用同一體系對臨床6種其它常見致病菌進行等溫擴增時未出現(xiàn)陽性條帶,提示整個體系特異度較好;④采用模板稀釋法驗證該LAMP體系檢測的靈敏度為10-4mg/L。結(jié)論建立了基于LAMP技術(shù)針對溶藻弧菌gyrB基因的快速檢測方法,具有良好的特異度和敏感度,對快速檢測溶藻弧菌有重要意義。 

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 研究對象
    1.2 試劑和儀器
    1.3 方法
        1.3.1 細菌核酸粗提物制備：
        1.3.2 LAMP反應(yīng)體系：
        1.3.3 反應(yīng)溫度的優(yōu)化：
        1.3.4 反應(yīng)時間的優(yōu)化：
2 結(jié)果
    2.1 不同溫度下擴增效果的比較
    2.2 不同反應(yīng)時間擴增效果的比較
    2.3 特異性評價
    2.4 靈敏度評價
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]Taqman-探針熒光定量PCR鑒定溶藻弧菌方法的建立[J]. 陳昌國,侯兵兵,陳秋圓,郭建巍,趙強元.  實用檢驗醫(yī)師雜志. 2017(01)
[2]LAMP技術(shù)在動物病毒病原檢測中的應(yīng)用進展[J]. 周廣舟,徐蘇麗,譚曉榮,陳小兵.  中國人獸共患病學(xué)報. 2013(02)
[3]中國海域海洋細菌分布特征分析[J]. 馬聰,陳昌國,蔣學(xué)兵,李丹丹,劉敏,郝秀紅,馬學(xué)斌,錢揚會.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2012(09)
[4]溶藻弧菌對水產(chǎn)動物致病性及其防治的研究進展[J]. 苑淑賓,朱愛意.  浙江海洋學(xué)院學(xué)報(自然科學(xué)版). 2012(03)
[5]溶藻弧菌TaqMan實時PCR快速檢測體系的建立[J]. 王海波,張京云,王多春,闞飆.  中國衛(wèi)生檢驗雜志. 2011(05)
[6]溶藻弧菌引起暴發(fā)型食物中毒的病原學(xué)研究[J]. 封會茹,游京蓉,劉玉堂,李珊.  中國食品衛(wèi)生雜志. 2003(04)



本文編號：3723920