發(fā)布時(shí)間：2022-12-17 15:56

　　目的:通過過表達(dá)AKAP121來在線粒體部分富集PKA誘導(dǎo)神經(jīng)保護(hù)性線粒體重塑,檢測(cè)線粒體抗氧化指標(biāo)的變化,并探究AKAP12A/PKA誘導(dǎo)的線粒體重塑對(duì)小鼠海馬細(xì)胞系HT22-谷氨酸氧化應(yīng)激模型的保護(hù)作用,同時(shí),在通過反復(fù)暴露于高濃度谷氨酸中誘導(dǎo)的HT22-R谷氨酸抵抗的細(xì)胞中,研究AKAP121/PKA以及線粒體抗氧化指標(biāo)的變化。方法:HT22細(xì)胞轉(zhuǎn)染AKAP121,S-AKAP84,OMM-PKA,Drp1-656D后,與對(duì)照組同時(shí)加入4m M濃度谷氨酸孵育,CCK8觀察細(xì)胞活力變化。HT22細(xì)胞轉(zhuǎn)染AKAP121,S-AKAP84,OMM-PKA,Drp1-656D后,在正常情況下,檢測(cè)相應(yīng)線粒體抗氧化指標(biāo)SOD2與GSH的變化,并用免疫熒光顯微鏡得到線粒體融合度與線粒體含量的變化。結(jié)果:1.不同谷氨酸濃度孵育24h,HT22細(xì)胞的細(xì)胞活力變化。谷氨酸濃度為4m M時(shí),孵育24h,HT22細(xì)胞活力為對(duì)照組的25%（P＜0.05）。4m M濃度谷氨酸毒性下AKAP121有顯著的保護(hù)作用（P＜0.001）。2.OMM-GFP,S-AKAP84,OMM-PKA定位在線粒體外膜。OMM... 

【文章頁數(shù)】：64 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
前言
中文摘要
Abstract
英文縮略詞注釋表
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.2 背景介紹
    1.3 AMPK調(diào)節(jié)線粒體的動(dòng)態(tài)變化，結(jié)構(gòu)與功能
        1.3.1 AMPK監(jiān)測(cè)并調(diào)控線粒體的質(zhì)量與更新
        1.3.2 AMPK通過MFF水平來調(diào)節(jié)線粒體分裂
    1.4 AMPK可以作為線粒體ROS感受器
        1.4.1 缺血時(shí)ROS激活A(yù)MPK調(diào)節(jié)細(xì)胞生存能力
    1.5 AMPK激活在腦缺血，缺血再灌注及缺血預(yù)處理有不同效應(yīng)
    1.6 AMPK在缺血時(shí)是一把雙刃劍
    1.7 AKAP121/PKA與AMPK協(xié)同調(diào)節(jié)細(xì)胞在缺血或糖尿病中的生存
    1.8 AMPK在糖尿病中的雙重作用
    1.9 AKAP121與AMPK作為靶點(diǎn)治療相關(guān)疾病的展望
第2章
    2.1 PKA/AKAP121誘導(dǎo)神經(jīng)保護(hù)性線粒體重塑對(duì)小鼠海馬細(xì)胞系HT22-谷氨酸氧化應(yīng)激模型的保護(hù)作用
第3章 材料與方法
    3.1 材料
        3.1.1 細(xì)胞株與質(zhì)粒
        3.1.2 藥品與試劑
        3.1.3 實(shí)驗(yàn)儀器
    3.2 方法
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        3.2.2 細(xì)胞傳代
        3.2.3 細(xì)胞凍存
        3.2.4 細(xì)胞復(fù)蘇
        3.2.5 細(xì)胞96孔板種板
        3.2.6 HT22細(xì)胞系轉(zhuǎn)染
        3.2.7 各轉(zhuǎn)染組谷氨酸處理及CCK-8 實(shí)驗(yàn)
        3.2.8 總GSH, ATP測(cè)定
        3.2.9 HT22- Resistance(谷氨酸抵抗)細(xì)胞系的培育
        3.2.10 HT22細(xì)胞線粒體分離
        3.2.11 線粒體融合度測(cè)定
        3.2.12 線粒體超氧化物測(cè)定
        3.2.13 Western blot
        3.2.14 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
第4章 結(jié)果
    4.1 過表達(dá)AKAP121對(duì)谷氨酸氧化應(yīng)激模型的保護(hù)作用
    4.2 過表達(dá)S-AKAP84，OMM-PKAC通過磷酸化DRP1增大了HT22細(xì)胞線粒體的融合度
    4.3 過表達(dá)AKAP121，OMM-PKAC增加了HT22細(xì)胞胞內(nèi)總GSH，線粒體SOD2，減少了線粒體部分的超氧陰離子
    4.4 過表達(dá)線粒體分裂蛋白DRP1-656D-PKA假磷酸化質(zhì)�？梢阅MPKA/AKAP121對(duì)HT22-谷氨酸氧化應(yīng)激模型的保護(hù)作用
    4.5 HT22-RESISTANCE谷氨酸抵抗細(xì)胞系的AKAP121蛋白水平，胞內(nèi)CREB信號(hào)，線粒體SOD2含量是升高的
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
作者簡介及在學(xué)期間所取得的科研成果
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]T3-induced liver AMP-activated protein kinase signaling:Redox dependency and upregulation of downstream targets[J]. Luis A Videla,Virginia Fernández,Pamela Cornejo,Romina Vargas,Paula Morales,Juan Ceballo,Alvaro Fischer,Nicolás Escudero,Oscar Escobar.  World Journal of Gastroenterology. 2014(46)



本文編號(hào)：3720217