肺炎鏈球菌是一種革蘭氏陽(yáng)性菌,能夠引起高死亡率的侵襲性肺炎疾病。莢膜多糖是肺炎鏈球菌的主要致病成分,早期曾以莢膜多糖作為疫苗預(yù)防肺炎鏈球菌的感染。然而,莢膜多糖是一種T細(xì)胞非依賴抗原,免疫持續(xù)時(shí)間短,不能誘導(dǎo)免疫記憶,不能為嬰幼兒和兒童提供免疫保護(hù)作用。肺炎莢膜多糖與具有輔助性T細(xì)胞抗原表位的載體蛋白共價(jià)結(jié)合,這種多糖結(jié)合疫苗會(huì)極大改善多糖的免疫學(xué)性質(zhì),并能有效保護(hù)嬰幼兒和兒童。例如,2010年于美國(guó)上市的13價(jià)肺炎結(jié)合疫苗顯著降低了侵襲性肺炎鏈球菌疾病的發(fā)病率。然而,肺炎多糖結(jié)合疫苗的免疫保護(hù)作用有待進(jìn)一步優(yōu)化。研究表明多糖鏈的長(zhǎng)度、糖蛋白比、化學(xué)結(jié)合策略等因素會(huì)影響結(jié)合疫苗的免疫學(xué)性質(zhì)。有文獻(xiàn)報(bào)道,適當(dāng)?shù)淖魟┡c多糖結(jié)合疫苗上的載體蛋白偶聯(lián)會(huì)提高結(jié)合疫苗的免疫原性。此外,由于結(jié)合疫苗中存在載體蛋白誘導(dǎo)的表位抑制作用（CIES）,即較高的載體蛋白特異性抗體滴度會(huì)抑制多糖特異性抗體的產(chǎn)生。因此,通過(guò)適當(dāng)屏蔽載體蛋白的抗原表位降低CIES效應(yīng),是改善結(jié)合疫苗免疫學(xué)性質(zhì)的有效策略之一。近期的研究結(jié)果表明,苯環(huán)作為連接橋可以改變PEG的構(gòu)象,能更為有效地屏蔽葡激酶的抗原表位,從而改善葡激酶在體... 

【文章頁(yè)數(shù)】：70 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 肺炎鏈球菌及其致病性
        1.1.1 肺炎鏈球菌生物學(xué)特征
        1.1.2 肺炎鏈球菌致病概況
        1.1.3 肺炎球菌疾病的防治
    1.2 多糖結(jié)合疫苗設(shè)計(jì)策略
        1.2.1 多糖抗原的選擇及修飾
        1.2.2 載體蛋白的選擇及修飾
        1.2.3 糖蛋白偶聯(lián)方式及結(jié)合策略
    1.3 結(jié)合疫苗的分離純化技術(shù)
        1.3.1 離子交換層析
        1.3.2 超濾
        1.3.3 尺寸排阻層析
    1.4 結(jié)合疫苗的物理化學(xué)性質(zhì)檢測(cè)方法
        1.4.1 十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳
        1.4.2 尺寸排阻層析
        1.4.3 核磁共振
        1.4.4 圓二色光譜
        1.4.5 內(nèi)源熒光光譜
        1.4.6 多糖蛋白測(cè)定方法
        1.4.7 動(dòng)態(tài)光散射
    1.5 結(jié)合疫苗免疫學(xué)性質(zhì)檢測(cè)方法
    1.6 立題依據(jù)及研究思路
        1.6.1 立題依據(jù)
        1.6.2 研究思路
2 14型肺炎多糖結(jié)合疫苗的制備
    2.1 材料與方法
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            2.1.2.1 14型肺炎多糖(PS)的衍化
            2.1.2.2 破傷風(fēng)類毒素(TT)的衍生化
            2.1.2.3 多糖與破傷風(fēng)類毒素的偶聯(lián)
        2.1.3 多糖結(jié)合疫苗偶聯(lián)效果鑒定及分離純化
            2.1.3.1 SDS-PAGE電泳法鑒定
            2.1.3.2 尺寸排阻層析法分離純化
        2.1.4 多糖結(jié)合疫苗的結(jié)構(gòu)分析
            2.1.4.1 總糖量的測(cè)定
            2.1.4.2 游離多糖的測(cè)定
            2.1.4.3 蛋白濃度的測(cè)定
            2.1.4.4 多糖修飾程度的測(cè)定
            2.1.4.5 動(dòng)態(tài)光散射
            2.1.4.6 ~1H核磁波譜鑒定
    2.2 結(jié)果與討論
        2.2.1 SDS-PAGE電泳
        2.2.2 多糖蛋白衍化
        2.2.3 尺寸排阻層析
        2.2.4 蛋白濃度測(cè)定
        2.2.5 游離多糖比例和多糖蛋白比率的測(cè)定
        2.2.6 動(dòng)態(tài)光散射測(cè)定
        2.2.7 核磁共振氫譜鑒定
    2.3 本章小結(jié)
3 肺炎多糖結(jié)合疫苗免疫學(xué)評(píng)價(jià)
    3.1 材料與方法
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.2 實(shí)驗(yàn)方法
            3.1.2.1 動(dòng)物免疫
            3.1.2.2 包被抗原的制備
            3.1.2.3 抗體滴度檢測(cè)
            3.1.2.4 抗14型肺炎莢膜多糖IgG抗體特異性檢測(cè)
            3.1.2.5 抗14型肺炎莢膜多糖IgG抗體親合性檢測(cè)
            3.1.2.6 抗原的完整性檢測(cè)
            3.1.2.7 脾細(xì)胞細(xì)胞因子分泌水平檢測(cè)
    3.2 結(jié)果與討論
        3.2.1 抗體水平檢測(cè)
            3.2.1.1 抗肺炎14型莢膜多糖IgM、IgG及其亞型的抗體滴度測(cè)定
            3.2.1.2 連接分子特異性IgG檢測(cè)
            3.2.1.3 苯環(huán)特異性IgG檢測(cè)
            3.2.1.4 抗TT的IgG及其亞型的抗體滴度測(cè)定
            3.2.1.5 抗肺炎14型莢膜多糖抗體特異性檢測(cè)
            3.2.1.6 抗肺炎14型莢膜多糖抗體親合力
            3.2.1.7 抗原完整性檢測(cè)
        3.2.2 脾細(xì)胞培養(yǎng)上清細(xì)胞因子水平檢測(cè)
    3.3 本章小結(jié)
4 結(jié)論
    4.1 主要研究成果
    4.2 論文創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
致謝
個(gè)人簡(jiǎn)歷及發(fā)表文章目錄


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]肺炎球菌疫苗進(jìn)展[J]. 栗克喜.  微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2002(02)
[5]結(jié)合疫苗概述[J]. 王燕,王秉瑞,謝貴林.  微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2000(01)



本文編號(hào)：3713983