Notch1及其配體在誘導(dǎo)B細(xì)胞產(chǎn)生抗體中的作用研究
發(fā)布時(shí)間:2022-11-12 13:34
背景作為體液免疫的一部分,B細(xì)胞在機(jī)體適應(yīng)性免疫調(diào)節(jié)中具有重要作用,機(jī)體產(chǎn)生的抗體(Antibody,Ab)在感染性疾病、腫瘤、自身免疫病和移植排斥中扮演重要角色?贵w是由B細(xì)胞分化、發(fā)育而來(lái)的漿細(xì)胞所分泌的。B細(xì)胞的分化發(fā)育和活化過(guò)程受許多信號(hào)通路的調(diào)節(jié),例如 PI3K(Phosphoinositide 3-kiase)信號(hào)通路,NF-κB((Nuclearfactor of kappa B)信號(hào)通路,BCR(B-cell receptor)信號(hào)通路和Notch信號(hào)通路,其中Notch信號(hào)通路在B細(xì)胞中的功能是當(dāng)前的研究熱點(diǎn)之一。早在1917年,遺傳學(xué)家Thomas Hunt Morgan和他的同事在具有殘缺翅膀表型的果蠅中首次描述了 Notch基因,Notch受體是一類(lèi)高度保守的跨膜蛋白,在結(jié)構(gòu)上分為胞外區(qū)(NEC),跨膜區(qū)(NTM)和胞內(nèi)域(NICD),哺乳類(lèi)動(dòng)物Notch受體家族有四個(gè)成員,分別為Notch1-4,可與五個(gè)配體相結(jié)合(Delta-like1,3,4和Jagged1,2),Notch信號(hào)通路的激活起始于鄰近細(xì)胞表面的配體-受體相互作用,進(jìn)而影響目的基因的轉(zhuǎn)錄。目前...
【文章頁(yè)數(shù)】:56 頁(yè)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【文章目錄】:
摘要
ABSTRACT
前言
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物
1.1.2 主要試劑
1.1.3 引物設(shè)計(jì)
1.1.4 常用試劑的配制
1.2 方法
1.2.1 小鼠的繁殖
1.2.2 小鼠基因型鑒定
1.2.3 蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blotting)
1.2.4 從細(xì)胞中提取總RNA
1.2.5 將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA
1.2.6 Real-time Q-PCR
1.2.7 流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)
1.2.8 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)
2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1 Notch1在LPS刺激的CD19~(hi)B細(xì)胞上高表達(dá)
2.2 用CD19cre體系會(huì)使LPS刺激活化的B細(xì)胞上Notch1表達(dá)下降
2.3 B細(xì)胞特異性敲除Notch1后,用LPS刺激B細(xì)胞活化,抗體的產(chǎn)生減少
2.4 B細(xì)胞上Notch1敲除后,全脾細(xì)胞用LPS刺激培養(yǎng)后抗體的產(chǎn)生不受影響
2.5 B細(xì)胞上Notch1敲除后不影響實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓膜炎(EAE)小鼠抗體的產(chǎn)生
2.6 將Notch1蛋白與特異性敲除Notch1的B細(xì)胞共培養(yǎng),用LPS刺激培養(yǎng),可促進(jìn)抗體的產(chǎn)生
3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
參考文獻(xiàn)
致謝
在讀期間參加學(xué)術(shù)活動(dòng)及研究成果
本文編號(hào):3706464
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摘要
ABSTRACT
前言
1 材料和方法
1.1 材料
1.1.1 實(shí)驗(yàn)用動(dòng)物
1.1.2 主要試劑
1.1.3 引物設(shè)計(jì)
1.1.4 常用試劑的配制
1.2 方法
1.2.1 小鼠的繁殖
1.2.2 小鼠基因型鑒定
1.2.3 蛋白質(zhì)免疫印跡實(shí)驗(yàn)(Western blotting)
1.2.4 從細(xì)胞中提取總RNA
1.2.5 將RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA
1.2.6 Real-time Q-PCR
1.2.7 流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)
1.2.8 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)
2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
2.1 Notch1在LPS刺激的CD19~(hi)B細(xì)胞上高表達(dá)
2.2 用CD19cre體系會(huì)使LPS刺激活化的B細(xì)胞上Notch1表達(dá)下降
2.3 B細(xì)胞特異性敲除Notch1后,用LPS刺激B細(xì)胞活化,抗體的產(chǎn)生減少
2.4 B細(xì)胞上Notch1敲除后,全脾細(xì)胞用LPS刺激培養(yǎng)后抗體的產(chǎn)生不受影響
2.5 B細(xì)胞上Notch1敲除后不影響實(shí)驗(yàn)性變態(tài)反應(yīng)性腦脊髓膜炎(EAE)小鼠抗體的產(chǎn)生
2.6 將Notch1蛋白與特異性敲除Notch1的B細(xì)胞共培養(yǎng),用LPS刺激培養(yǎng),可促進(jìn)抗體的產(chǎn)生
3 討論
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
綜述
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在讀期間參加學(xué)術(shù)活動(dòng)及研究成果
本文編號(hào):3706464
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