人血清白蛋白（Human serum albumin,HSA）是存在于人血漿中的一種蛋白質(zhì),含量豐富,常作為載體蛋白,具有結(jié)合和運輸?shù)淖饔谩SA在人體內(nèi)的半衰期長,可用于融合多肽藥物蛋白從而延長藥物的半衰期,但HSA融合多肽藥物后分子量大,表達困難,也不易穿過血管壁,因此課題研究了新的抗HSA的單鏈抗體,單鏈抗體（Single-Chain Antibody Fragment,scFv）相比于完整的抗體分子,具有分子量小、組織穿透性好、結(jié)構(gòu)中無糖基化修飾等特點,適用于大腸桿菌進行表達和純化,相比于采用哺乳動物細胞表達,周期短,培養(yǎng)成本低。但大腸桿菌表達scFv也有存在著一些問題,如表達量低,難以可溶性表達等。本文通過HSA免疫小鼠進而制備雜交瘤細胞,通過測序得到抗HSA抗體的序列。將小泛素相關(guān)修飾物（Small ubiquitin-related modifier,SUMO）標簽用于scFv的表達,使用表達的泛素樣特異性蛋白酶（Ubiquitin-like specific protease,Ulp1）進行標簽切除,成功得到了可溶性的scFv,并對scFv進行了結(jié)構(gòu)分析。主要研究成果如... 

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
縮略詞
第一章 緒論
    1.1 抗體結(jié)構(gòu)簡介
    1.2 抗體分子的形式及其研究進展
    1.3 單鏈抗體在大腸桿菌中的表達純化
    1.4 重組蛋白融合技術(shù)在大腸桿菌中的運用
        1.4.1 重組蛋白融合技術(shù)的優(yōu)點
        1.4.2 重組蛋白融合技術(shù)的缺點
    1.5 SUMO簡介
    1.6 SUMO蛋白酶簡介
    1.7 SUMO標簽及SUMO蛋白酶Ulp1在大腸桿菌表達中的運用
    1.8 HSA用于多肽藥物半衰期的延長
    1.9 課題研究內(nèi)容
        1.9.1 課題的來源和意義
        1.9.2 本課題的主要研究內(nèi)容
第二章 材料與方法
    2.1 實驗材料
        2.1.1 宿主菌及質(zhì)粒
        2.1.2 實驗主要試劑和儀器
        2.1.3 主要溶液
    2.2 實驗方法
        2.2.1 抗HSA抗體的制備、純化和檢測
        2.2.2 大腸桿菌感受態(tài)的制備
        2.2.3 大腸桿菌表達scFv重組菌株的構(gòu)建
        2.2.4 大腸桿菌表達SUMO-scFv重組菌株的構(gòu)建
        2.2.5 scFv和SUMO-scFv的表達
        2.2.6 表達SUMO蛋白酶Ulp1菌株的構(gòu)建、表達條件優(yōu)化及表達量測定
        2.2.7 SUMO蛋白酶Ulp1的Western blotting檢測
        2.2.8 SUMO蛋白酶Ulp1的純化
        2.2.9 Ulp1酶活測定及酶活特性分析
        2.2.10 融合蛋白SUMO-scFv及scFv純化
        2.2.11 抗體建模
第三章 結(jié)果與討論
    3.1 抗HSA抗體的制備及scFv的表達
        3.1.1 抗HSA抗體的制備及親和力檢測
        3.1.2 1H11抗體scFv的初步表達
        3.1.3 融合蛋白SUMO-scFv的表達菌株構(gòu)建
        3.1.4 SUMO-scFv的表達和純化
    3.2 SUMO蛋白酶Ulp1的表達純化及活性分析
        3.2.1 表達Ulp1的重組菌株的構(gòu)建
        3.2.2 Ulp1的表達條件優(yōu)化及Western blotting鑒定
        3.2.3 SUMO蛋白酶Ulp1的純化
        3.2.4 Ulp1酶活測定底物SUMO-EGFP的表達與純化
        3.2.5 Ulp1酶活測定及酶活特性分析
    3.3 融合蛋白SUMO-scFv的酶切及scFv的純化
    3.4 抗體與抗原HSA同源建模分析
主要結(jié)論與展望
    主要結(jié)論
    展望
致謝
參考文獻
附錄：作者在攻讀碩士學位期間發(fā)表的論文


【參考文獻】：
期刊論文
[1]人-鼠嵌合單鏈抗體的構(gòu)建及其在大腸桿菌中的高效可溶性表達和發(fā)酵條件優(yōu)化[J]. 劉萌,孫楊,楊艷坤,白仲虎.  生物學雜志. 2016(06)
[2]米曲霉蛋白酶的分離純化及酶學性質(zhì)研究[J]. 馬俊陽,諸葛斌,方慧英,宗紅,孫進,龔星慧,諸葛健,樓笑笑,馮倩.  微生物學通報. 2014(01)
[3]融合蛋白GST-Ulp1p在大腸桿菌中的高效可溶性表達及其活性鑒定[J]. 傅俊華,王琪,尹杰超,劉銘瑤,李寧,姚文斌,任桂萍,李璐,李德山.  生物工程學報. 2010(06)
[4]SUMO蛋白酶活性片段的表達、純化及活性測定[J]. 陳興華,李校堃,蘇志堅,蘇燁,馮婭,肖業(yè)臣,孟絹,王艷萍,黃亞東.  中國生物工程雜志. 2007(03)



本文編號：3697051