發(fā)布時(shí)間：2022-10-10 11:11

　　目的:研究HepG2細(xì)胞中線粒體形狀動(dòng)態(tài)變化過程中的功能變化及其初步分子機(jī)制。方法:HepG2細(xì)胞經(jīng)過HBSS緩沖液饑餓處理后,使用線粒體氧化磷酸化解偶聯(lián)劑CCCP、脂肪酸受體GPR40/120激動(dòng)劑GW9508、脂肪酸油酸OA和鈣離子載體Ionomycin等4種不同藥物處理,通過共聚焦顯微鏡觀察和流式細(xì)胞分析的手段檢測(cè)細(xì)胞中線粒體形狀和功能發(fā)生的改變。然后,通過基因沉默Drp1,Mff或者Fis1蛋白,初步研究調(diào)控線粒體形狀改變的分子機(jī)制。結(jié)果:經(jīng)過CCCP和GW9508處理細(xì)胞中產(chǎn)生甜甜圈線粒體,而OA和Ionomycin處理產(chǎn)生球狀線粒體。CCCP,OA和Ionomycin使線粒體去極化,CCCP、GW9508、OA或者Ionomycin單獨(dú)處理在一定程度上影響細(xì)胞中活性氧化簇ROS。甜甜圈線粒體產(chǎn)生由Drp1介導(dǎo),而球狀線粒體形成依賴于Drp1和Mff。結(jié)論:線粒體的形態(tài)與其功能相互聯(lián)系,Drp1和Mff蛋白對(duì)于細(xì)胞線粒體形狀動(dòng)態(tài)改變過程中形狀的調(diào)整和適應(yīng)具有很重要的作用。 

【文章頁(yè)數(shù)】：8 頁(yè)

【文章目錄】：
前言
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 試驗(yàn)材料
        1.1.2 試驗(yàn)儀器
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)和饑餓處理
        1.2.2 細(xì)胞轉(zhuǎn)染
        1.2.3 細(xì)胞固定和免疫熒光
        1.2.4 電鏡
        1.2.5 實(shí)時(shí)熒光定量PCR
        1.2.6 si RNA序列
        1.2.7 流式細(xì)胞分析
        1.2.8 圖像處理
    1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 甜甜圈線粒體和球狀線粒體的產(chǎn)生
    2.2 甜甜圈線粒體和球狀線粒體形成時(shí)間存在差異
    2.3 四種藥物處理對(duì)活性氧化簇和線粒體膜電位的影響
    2.4 Drp1和Mff參與調(diào)控線粒體形態(tài)
3 討論



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