目的:沙眼衣原體（Chlamydia trachomatis,Ct）屬于專性胞內(nèi)寄生的原核細(xì)胞型生物,通過抑制宿主細(xì)胞凋亡以完成其發(fā)育周期,但其抑制細(xì)胞凋亡的分子機(jī)制尚未完全闡明。pORF5蛋白是由Ct質(zhì)粒編碼的一種分泌性蛋白,能激活PI3K/AKT通路抑制細(xì)胞凋亡,本研究試圖探討pORF5質(zhì)粒蛋白與PI3K/AKT信號通路、HO-1的關(guān)系,以及HO-1是否在pORF5蛋白抗細(xì)胞凋亡中發(fā)揮作用,為闡明Ct致病機(jī)制提供實驗依據(jù)。方法:1.應(yīng)用LB固體培養(yǎng)基,37℃培養(yǎng)含p GEX-6p/pORF5重組質(zhì)粒的XL1-blue大腸桿菌24~36h,挑選單克隆菌落接種到LB液體培養(yǎng)基中,置于200rpm、37℃水浴搖床,振蕩過夜擴(kuò)大培養(yǎng),用終濃度為0.2m M的IPTG誘導(dǎo)GST-pORF5融合蛋白表達(dá)4h;通過谷胱甘肽-瓊脂糖凝膠純化GST融合蛋白,Pre Scission Protease切除融合蛋白GST標(biāo)簽,制備pORF5質(zhì)粒蛋白;用BCA法測定pORF5蛋白濃度,western blotting鑒定pORF5質(zhì)粒蛋白。2.pORF5蛋白以不同濃度（0、3、6、9、12μg/ml）、不... 

【文章頁數(shù)】：57 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
abstract
主要中英文縮寫
第1章 緒論
第2章 實驗材料
    2.1 主要實驗儀器
    2.2 載體、菌株及細(xì)胞株
    2.3 主要試劑盒
    2.4 主要實驗試劑
    2.5 其他
第3章 實驗方法
    3.1 純化與鑒定pORF5質(zhì)粒蛋白
    3.2 pORF5質(zhì)粒蛋白對HO-1蛋白表達(dá)的影響
    3.3 PI3K/AKT通路對pORF5質(zhì)粒蛋白上調(diào)HO-1表達(dá)的影響
    3.4 pORF5質(zhì)粒蛋白通過上調(diào)HO-1抑制細(xì)胞凋亡
    3.5 數(shù)據(jù)處理與統(tǒng)計學(xué)分析
第4章 實驗結(jié)果
    4.1 pORF5融合蛋白的表達(dá)、純化與鑒定
    4.2 pORF5蛋白誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞HO-1表達(dá)上調(diào)
    4.3 質(zhì)粒蛋白pORF5通過PI3K/AKT上調(diào)HO-1
    4.4 HO-1對pORF5凋亡抑制作用的影響
第5章 討論
第6章 結(jié)論
參考文獻(xiàn)
文獻(xiàn)綜述 活性氧介導(dǎo)的信號通路在衣原體感染過程中的作用機(jī)制研究進(jìn)展
    1 ROS的生成與衣原體感染
    2 活性氧介導(dǎo)的信號通路及其對衣原體感染細(xì)胞的影響
    3 展望
    參考文獻(xiàn)
作者攻讀學(xué)位期間的科研成果
    一、發(fā)表的論文
    二、參與課題
本研究受以下課題資助
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]細(xì)胞凋亡途徑及其機(jī)制[J]. 李敏,林俊.  國際婦產(chǎn)科學(xué)雜志. 2014(02)



本文編號：3689256