發(fā)布時(shí)間：2022-08-23 20:44

　　目的藍(lán)氏賈第鞭毛蟲（簡稱為賈第蟲）甲硫氨酸硫氧化物還原酶基因（GlMSR）,進(jìn)行原核表達(dá)獲得其重組蛋白。方法依據(jù)GenBank中GlMSR序列設(shè)計(jì)引物,以賈第蟲中國C2克隆株基因組DNA為模板,通過PCR擴(kuò)增編碼序列,將所得片段連接至質(zhì)粒pET28a以構(gòu)建原核表達(dá)載體pET28a-GlMSR,將pET28a-GlMSR導(dǎo)入大腸桿菌E.coli JM109并挑取陽性克隆進(jìn)行基因測序和鑒定。用化學(xué)方法將經(jīng)測序驗(yàn)證的重組質(zhì)粒pET28a-GlMSR轉(zhuǎn)化至E.coli BL21（DE3）。經(jīng)異丙基硫代半乳糖苷（Isopropylβ-D-Thiogalactoside, IPTG）誘導(dǎo)表達(dá)后,聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測重組蛋白表達(dá)結(jié)果。收集沉淀中的重組表達(dá)產(chǎn)物,鎳柱親和層析純化帶組氨酸標(biāo)簽的重組蛋白,并通過免疫印跡鑒定純化結(jié)果。結(jié)果電泳結(jié)果顯示在約624 bp處出現(xiàn)目的 DNA條帶,表明成功得到GlMSR編碼序列;PCR鑒定、酶切鑒定以及基因測序結(jié)果表明成功構(gòu)建重組表達(dá)載體pET28a-GlMSR,經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后在沉淀中獲得目的蛋白,目的蛋白分子量（Mr）約為25 000,與預(yù)期分子量（Mr）22... 

【文章頁數(shù)】：4 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 材料
        1.1.1 蟲株、質(zhì)粒和菌株
        1.1.2 主要試劑和工具酶
    1.2 方法
        1.2.1 蟲體基因組DNA的提取
        1.2.2 GlMSR基因擴(kuò)增
        1.2.3 連接目的片段與載體
        1.2.4 重組蛋白GlMSR的誘導(dǎo)表達(dá)
        1.2.5 重組蛋白的純化
        1.2.6 重組蛋白免疫印跡分析
2 結(jié)果
    2.1 GlMSR基因的克隆
    2.2 重組質(zhì)粒pET28a-GlMSR的鑒定
    2.3 重組蛋白的表達(dá)與純化
    2.4 純化重組蛋白的免疫印跡分析
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]隱孢子蟲和藍(lán)氏賈第鞭毛蟲分子流行病學(xué)研究進(jìn)展[J]. 徐寧,尹建海,沈玉娟,劉華,曹建平.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2018(06)
[2]河南省人體腸道原蟲感染現(xiàn)狀分析[J]. 劉穎,李素華,張雅蘭,劉若凝,錢丹,楊成運(yùn),周瑞敏,賀麗君,魯?shù)骂I(lǐng),鄧艷,陳偉奇,趙玉玲,張紅衛(wèi),許汴利.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2018(03)
[3]藍(lán)氏賈第鞭毛蟲核苷二磷酸激酶基因的克隆與表達(dá)[J]. 袁義雪,鄭國俠,王丹丹,專行,杜萌,王云華.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2018(02)
[4]HIV/AIDS患者合并腸道原蟲感染狀況[J]. 滕雪嬌,陳家旭,田利光.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2017(06)
[5]藍(lán)氏賈第鞭毛蟲感染1例[J]. 宋鵬,張永年,李浩,陳韶紅.  中國寄生蟲學(xué)與寄生蟲病雜志. 2016(06)
[6]HIV/AIDS合并感染機(jī)會性致病原蟲血清流行病學(xué)分析[J]. 龐杏林,陳守義,高凱,麥惠霞,韓志剛,徐慧芳,楊智聰.  熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2015(10)
[7]賈第鞭毛蟲和隱孢子蟲的流行病學(xué)研究進(jìn)展[J]. 魏小紅,陳守義.  熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2014(02)
[8]藍(lán)氏賈第鞭毛蟲中國株組蛋白H2A基因的克隆與重組表達(dá)[J]. 王云華,鄭國俠,巨紅妹,張霞,李雅杰.  熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2011(10)
[9]中國人源藍(lán)氏賈第鞭毛蟲ppdk基因的克隆及其表達(dá)產(chǎn)物的鑒定[J]. 張永輕,滕美君,王云華,李雅杰.  中國病原生物學(xué)雜志. 2010(11)

碩士論文
[1]甲硫氨酸硫氧化物還原酶A對氧化應(yīng)激狀態(tài)下黑素細(xì)胞活性的影響[D]. 周舟.第四軍醫(yī)大學(xué) 2009



本文編號：3678449