心血管疾病是威脅人類健康的最常見疾病,且造成巨大的經(jīng)濟損失。治療心血管疾病的新藥研發(fā)一直是藥學(xué)領(lǐng)域的研發(fā)重點。然而與之相配套的藥物毒性的早期篩查和預(yù)測的新模型和技術(shù)系統(tǒng),仍相對落后。一種具有心臟風(fēng)險的新藥的上市和撤市,除造成人員生命財產(chǎn)的損失外,還導(dǎo)致藥物研發(fā)領(lǐng)域人力、物力和時間的巨大浪費。因而,建立一個靈敏、準(zhǔn)確、高通量、可早期介入的藥物心臟安全性的體內(nèi)評價系統(tǒng),尤為重要和必要。斑馬魚是一種脊椎類的小型模式動物,繁殖力強,體外受精和發(fā)育,其生長發(fā)育過程、組織系統(tǒng)結(jié)構(gòu)與人類有很高的相似性,在基因和蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能上也具有很高的保守性。目前已經(jīng)具有成熟的斑馬魚細胞標(biāo)記技術(shù)、突變技術(shù)、基因活性移植技術(shù)和顯微注射技術(shù)等各種分子生物學(xué)技術(shù)。因此斑馬魚成為研究人類疾病的發(fā)生發(fā)展機制、預(yù)防和治療,以及新藥研發(fā)的優(yōu)良模式動物。尤其是斑馬魚的心臟結(jié)構(gòu)清晰,易于觀察；雖然其心臟為兩腔心臟——一房一室,但其發(fā)生和發(fā)育路線及相關(guān)基因調(diào)控機制與人類接近,在胚胎和幼體階段心臟位于體表,非常適于進行心臟疾病模型和心臟毒理的研究。因此,本研究選用斑馬魚為模式動物建立藥物心臟毒性的檢測模型。本論文的主要成果如下：1... 

【文章頁數(shù)】：139 頁

【學(xué)位級別】：博士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
論文縮寫詞中英文對照
第一部分 斑馬魚Mil/slpr2和vmhc基因的功能研究
    前言
    技術(shù)路線
    第一章 斑馬魚Mil/slpr2基因的功能研究
        材料與方法
            1. 實驗材料
            2. 實驗方法
        實驗結(jié)果
            3.1 啟動子的克隆及序列分析
            3.2 mil啟動子序列的缺失實驗及功能分析
            3.3 野生型斑馬魚中mil基因的表達pattern
            3.4 mil基因功能研究
            3.5 斑馬魚胚胎mil基因knockdown和過表達的表達分布圖示
            3.6 mil knockdown后對心臟marker基因表達的影響
            3.7 mil基因下調(diào)或上調(diào)后后對神經(jīng)marker基因表達的影響
            3.8 mil基因knockdown或過表達對聽力相關(guān)基因表達的影響
            3.9 mil基因knockdown使斑馬魚幼體神經(jīng)丘和毛細胞生成減少
            3.10 mil基因過表達使斑馬魚幼體側(cè)線神經(jīng)丘和毛細胞過度增生
        討論
            4.1 mil基因在心血管系統(tǒng)發(fā)育中的作用
            4.2 mil基因在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育中具有重要的作用
            4.3 mil基因?qū)?nèi)耳的發(fā)育具有至關(guān)重要的作用
            4.4     mil基因可能存在雙重啟動子的調(diào)控
    第二章 Vmhc基因啟動序列指導(dǎo)的GFP轉(zhuǎn)基因魚的研究
        實驗材料與方法
        實驗結(jié)果
            2.1 vmhc啟動子序列的克隆分析及表達載體的構(gòu)建
            2.2 Pvmhc-EGFP基因構(gòu)件在斑馬魚心臟特異表達
            2.3 EGFP對心率的影響
            2.4 Pvmhc-EGFP基因表達構(gòu)件轉(zhuǎn)基因魚的傳代分析
        討論
            4.1 心臟標(biāo)記GFP的轉(zhuǎn)基因斑馬魚的制備
            4.2 心臟標(biāo)記GFP的轉(zhuǎn)基因斑馬魚模型的優(yōu)勢
    參考文獻 (第一、二章)
第二部分 藥物心臟毒性的斑馬魚評價模型
    前言
    技術(shù)路線
    材料方法
        1. 實驗材料
        2. 實驗方法
    實驗結(jié)果
        3.1 野生型斑馬魚的心律
        3.2 幼體階段給藥terfenadine心臟異常模型
        3.3 幼體階段給藥維拉帕米(verapamil)心臟異常模型
        3.4 幼體階段給藥moxifloxacin后心臟異常模型
        3.5 胚胎階段給藥維生素A(Va)異常模型
    討論
        4.1 野生型斑馬魚心律標(biāo)準(zhǔn)的建立
        4.2 Terfenadine可導(dǎo)致斑馬魚幼魚心臟淤血并心律失常
        4.3 Terfenadine的急性毒性使斑馬魚胚胎心臟marker基因表達發(fā)生變化
        4.5 Verapamil引起斑馬魚胚胎心律失常
        4.6 Moxifloxacin誘使斑馬魚幼體發(fā)生嚴重心律失常
        4.7 外源性va誘導(dǎo)斑馬魚心臟發(fā)育畸形
        4.8 葉酸在一定程度上可以挽救胚胎發(fā)育的畸形形態(tài)
    參考文獻
論文結(jié)論
綜述
    第一部分 人類心臟病概況和疾病模型研究
        1. 人類心臟病概述
        2. 人類心臟病疾病模型研究
    第二部分 誘發(fā)心臟疾病的藥物
    參考文獻
附錄
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]斑馬魚紅系造血缺陷突變體的正向遺傳學(xué)篩選[J]. 霍中軍,溫宗華,劉靖,王鹍,黃志斌,戴朝霞,馬寧,顏廣,陳英華,陳小輝,劉偉,馬品蕓,羅偉豪,趙穎,樊淑,趙嘉佳,黃紅輝,溫子龍,張文清.  南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2010(05)
[2]Inactivation gating determines drug potency:a common mechanism for drug blockade of HERG channels[J]. Bao-feng YANG1, Dong-hui XU2, Chao-qian XU, Zhe LI, Zhi-min DU, Hui-zhen WANG, De-li DONGDepartment of Pharmacology, Harbin Medical University, Harbin 150086, China;2Department of Pharmacy, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510080, China.  Acta Pharmacologica Sinica. 2004(05)



本文編號：3673032