T細(xì)胞免疫球蛋白和免疫受體酪氨酸抑制性基序結(jié)構(gòu)域[T-cell immunoglobulin and immunoreceptor tyrosinebased inhibitory motif （ITIM） domain,TIGIT]是一種新型的免疫抑制性受體,在機(jī)體的免疫調(diào)節(jié)網(wǎng)絡(luò)中扮演著重要角色。為了進(jìn)一步探究TIGIT對(duì)自然殺傷（natural killer,NK）細(xì)胞的免疫調(diào)節(jié)功能,構(gòu)建了融合蛋白TIGIT胞外段（即TIGIT第1～135位氨基酸,以保留功能結(jié)構(gòu)域Ig V區(qū),此胞外段簡(jiǎn)稱為TIG）-人免疫球蛋白G3（immunoglobulin G3,Ig G3） Fc段的真核表達(dá)載體,并對(duì)TIG-Fc融合蛋白的表達(dá)及其對(duì)NK-92細(xì)胞功能的影響進(jìn)行了初步研究。利用分子生物學(xué)方法,將攜帶人TIG與人Ig G3 Fc段的基因融合,然后插入真核表達(dá)載體pc DNA3.1（-）中,以構(gòu)建重組質(zhì)粒pc DNA3.1（-）-TIGFc。隨后將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至人胚腎細(xì)胞HEK-293T中,通過(guò)流式細(xì)胞儀和Western blot檢測(cè)TIG-Fc融合蛋白在293T細(xì)胞中的表達(dá);再將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至... 

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【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 實(shí)驗(yàn)材料
    1.2 pcDNA3.1(-)-TIG-Fc真核表達(dá)載體的構(gòu)建
    1.3 細(xì)胞培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染
    1.4 流式細(xì)胞儀檢測(cè)
    1.5 Western blot法檢測(cè)
    1.6 細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)
    1.7 ELISA檢測(cè)
    1.8 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)分析
2 結(jié)果與分析
    2.1 pcDNA3.1(-)-TIG-Fc表達(dá)載體的構(gòu)建與鑒定
    2.2 TIG-Fc融合蛋白在293T細(xì)胞中的表達(dá)
    2.3 Western blot法鑒定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系中融合蛋白的表達(dá)
    2.4 TIG-Fc對(duì)NK細(xì)胞增殖的影響
    2.5 TIG-Fc對(duì)NK-92細(xì)胞分泌IFN-γ水平的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]系統(tǒng)性紅斑狼瘡患者外周血NK細(xì)胞TIGIT的表達(dá)和意義[J]. 李雪,黃自坤,鄧楨,羅清.  免疫學(xué)雜志. 2018(07)
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[4]一種新的免疫抑制性受體TIGIT[J]. 方亮,陳麗華,金伯泉.  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2012(01)
[5]MTT、MTS、WST-1在細(xì)胞增殖檢測(cè)中最佳實(shí)驗(yàn)條件的研究[J]. 李紅艷,夏啟勝,徐梅,房青,徐波,陳志華,向青.  中國(guó)康復(fù)醫(yī)學(xué)雜志. 2005(11)



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