β₂微球蛋白（β₂-microglobulin,β₂M）在慢性腎衰竭患者體內(nèi)不能被正常代謝,過(guò)量的β₂M積累會(huì)導(dǎo)致淀粉樣變,目前血液透析無(wú)法去除過(guò)量的β₂M。納米抗體體積小、親和力高、免疫性強(qiáng)、易于融合表達(dá),在免疫吸附治療方面有重要的價(jià)值。因此,制備大量的抗β₂M納米抗體具有重要的臨床意義,E.coli由于其低廉的培養(yǎng)成本和簡(jiǎn)單的操作過(guò)程,被認(rèn)為是首選的制備納米抗體的策略。抗β₂M納米抗體83F對(duì)β₂M親和力較高,結(jié)合特異性較強(qiáng),但初步研究發(fā)現(xiàn),其主要以包涵體形式存在。為了獲得更多有活性的83F,本論文從不同宿主、不同融合標(biāo)簽表達(dá)及優(yōu)化包涵體復(fù)性條件等多方面進(jìn)行了研究。具體研究?jī)?nèi)容如下:（1）抗β₂M納米抗體83F的載體構(gòu)建及表達(dá):通過(guò)基因重組技術(shù),將抗β₂M的納米抗體83F基因序列克隆入pET29a、pET32a、pET39b、pET40b、pET41a及pET28a... 

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【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
引言
1 文獻(xiàn)綜述
    1.1 β_2微球蛋白與疾病
        1.1.1 β_2微球蛋白的簡(jiǎn)介
        1.1.2 β_2微球蛋白與相關(guān)疾病
        1.1.3 透析相關(guān)淀粉樣病變的血液凈化治療
        1.1.4 β_2微球蛋白在臨床上的應(yīng)用
    1.2 納米抗體技術(shù)
        1.2.1 納米抗體的簡(jiǎn)介
        1.2.2 納米抗體結(jié)構(gòu)特點(diǎn)及生物化學(xué)性質(zhì)
        1.2.3 納米抗體的應(yīng)用
    1.3 融合標(biāo)簽技術(shù)
        1.3.1 融合標(biāo)簽技術(shù)簡(jiǎn)介
        1.3.2 融合標(biāo)簽的種類
        1.3.3 融合標(biāo)簽技術(shù)的應(yīng)用
        1.3.4 融合標(biāo)簽技術(shù)的移除策略
    1.4 包涵體的復(fù)性
        1.4.1 包涵體的概述
        1.4.2 包涵體復(fù)性及影響因素
        1.4.3 包涵體復(fù)性的常用方法
    1.5 本論文研究目的及意義
2 抗β_2微球蛋白納米抗體83F的融合表達(dá)
    2.1 引言
    2.2 實(shí)驗(yàn)材料
        2.2.1 實(shí)驗(yàn)材料及儀器
        2.2.2 主要儀器及耗材
    2.3 實(shí)驗(yàn)方法
        2.3.1 六種納米抗體重組表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.3.2 重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)化表達(dá)菌株
        2.3.3 重組蛋白83F的誘導(dǎo)表達(dá)
        2.3.4 重組蛋白83F的可溶性檢測(cè)
        2.3.5 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳
        2.3.6 金屬離子螯合層析
        2.3.7 納米抗體83F蛋白純度的分析及回收率的計(jì)算
        2.3.8 ELISA法檢測(cè)抗β_2M納米抗體83F的抗原結(jié)合活性
        2.3.9 SPR測(cè)定抗β_2M納米抗體83F的親和力
        2.3.10 抗β_2M納米抗體83F融合標(biāo)簽的切除
    2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        2.4.1 納米抗體83F融合表達(dá)載體的構(gòu)建
        2.4.2 納米抗體83F的表達(dá)
        2.4.3 納米抗體83F的純化及純度分析
        2.4.4 納米抗體83F的活性檢測(cè)
        2.4.5 納米抗體83F融合標(biāo)簽的切除
        2.4.6 SPR檢測(cè)切除標(biāo)簽后納米抗體83F的親和力
    2.5 本章小結(jié)
3 抗β_2微球蛋白納米抗體83F的包涵體復(fù)性
    3.1 引言
    3.2 實(shí)驗(yàn)材料
        3.2.1 材料及試劑
        3.2.2 主要儀器
    3.3 實(shí)驗(yàn)方法
        3.3.1 包涵體的收集、初步純化及變性
        3.3.2 金屬離子螯合層析
        3.3.3 重組蛋白的稀釋復(fù)性及優(yōu)化
        3.3.4 蛋白純度的分析及蛋白回收率的計(jì)算
        3.3.5 復(fù)性后蛋白抗原結(jié)合活性的ELISA檢測(cè)
        3.3.6 SPR測(cè)定抗β_2M納米抗體的親和力
        3.3.7 圓二色測(cè)定抗β_2M納米抗體的二級(jí)結(jié)構(gòu)
    3.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果與討論
        3.4.1 納米抗體83F包涵體的純化
        3.4.2 納米抗體83F包涵體復(fù)性條件優(yōu)化
        3.4.3 SPR測(cè)定復(fù)性后納米抗體83F的親和力
    3.5 本章小結(jié)
結(jié)論
展望
參考文獻(xiàn)
附錄A 抗β_2M納米抗體基因序列信息
攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表學(xué)術(shù)論文情況
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[3]血、尿β2微球蛋白在診斷糖尿病腎病患者早期腎損傷中的價(jià)值分析[J]. 陳樹(shù)華.  中國(guó)醫(yī)學(xué)創(chuàng)新. 2017(15)
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[7]納米抗體及其在診斷檢測(cè)中的研究進(jìn)展[J]. 孔慶明,姚亞波,陳睿,陸紹紅.  生物工程學(xué)報(bào). 2014(09)
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博士論文
[1]變性蛋白復(fù)性裝置研制及包涵體蛋白變性和復(fù)性技術(shù)研究[D]. 馮延葉.華東理工大學(xué) 2013

碩士論文
[1]重組大腸桿菌表達(dá)包涵體藥物蛋白的復(fù)性與純化研究[D]. 何偉.華東理工大學(xué) 2017
[2]抗EGFR納米抗體的制備及其活性研究[D]. 宋曉鈺.大連理工大學(xué) 2015
[3]藍(lán)細(xì)菌融合標(biāo)簽技術(shù)分離純化蛋白質(zhì)方法的建立與優(yōu)化[D]. 晉虎.天津大學(xué) 2014



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