抗菌肽CGA-N12具有特異抗熱帶念珠菌（Candida tropicalis MYA-3404）抗性,能夠與合成熱帶念珠菌細(xì)胞壁β-1,6-葡聚糖的KRE9蛋白結(jié)合。因此,研究抗菌肽CGA-N12與KRE9蛋白之間的相互作用,對(duì)揭示抗菌肽CGA-N12在熱帶念珠菌上的作用靶點(diǎn)具有重要意義。首先,本研究構(gòu)建了重組載體pET28a-KRE9,在大腸桿菌BL21（DE3）中誘導(dǎo)表達(dá),經(jīng)SDS-PAGE和Western Blot分析,純化得到分子量為35 kDa的融合蛋白KRE9。通過測(cè)定單位時(shí)間內(nèi)葡萄糖的消耗量,得知融合蛋白KRE9有較高的酶活性。采用等溫滴定量熱法（ITC）檢測(cè)抗菌肽CGA-N12與KRE9蛋白的相互作用,結(jié)果表明:相互作用過程為吸熱反應(yīng);抗菌肽CGA-N12與KRE9之間的作用力主要是疏水作用力;結(jié)合位點(diǎn)在抗菌肽CGA-N12與KRE9比為6時(shí)達(dá)到飽和;N值在l左右,表明抗菌肽CGA-N12與KRE9結(jié)合為單個(gè)位點(diǎn)的結(jié)合模型;結(jié)合常數(shù)Ka值為1489²291,表明有較強(qiáng)的相互作用力。為了研究抗菌肽CGA-N12與KRE9蛋白相互作用時(shí)的距離,本研究... 

【文章來源】：河南工業(yè)大學(xué)河南省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

KRE9的空間結(jié)構(gòu)圖

http://www.ch.embnet.org/software/TMPRED_form.html 網(wǎng)站對(duì) K蛋白具有 2 個(gè)可能的跨膜螺旋區(qū)（圖 2）。因此抗菌肽 CGA-N12細(xì)胞內(nèi)部。圖 1 KRE9 的空間結(jié)構(gòu)圖Fig. 1 The structure of protein KRE9

圖 3 ITC 模式圖Fig. 3 Model of ITCITC 技術(shù)自二十多年前被提出后，最初由 Ernesto Freire 及其同事將該技術(shù)引入作用的研究領(lǐng)域[74]。人們通過 ITC 直接測(cè)量在恒定溫度下發(fā)生的反應(yīng)，以及反相關(guān)的能量變化。上世紀(jì) ITC 主要應(yīng)用于酶催化反應(yīng)[75-77]，配體結(jié)合大分子分子構(gòu)象變化[82]的熱力學(xué)特征。大量研究證明該技術(shù)可對(duì)從簡(jiǎn)單到復(fù)雜相互作學(xué)參數(shù)進(jìn)行測(cè)定。隨著 ITC 技術(shù)的廣泛應(yīng)用，特別是 2010 年以來，伴隨自動(dòng)使用，軟件系統(tǒng)的改進(jìn)，其技術(shù)手段越來越成熟。在 PubMed 索引的視頻期刊（Jo也已經(jīng)收錄了 ITC 方法[83-85]。目前基于 ITC 技術(shù)的最新研究進(jìn)展包括結(jié)合相互動(dòng)力學(xué)和熱力學(xué)信息的 KinITC[86]，以及高親和力結(jié)合反應(yīng)的 ITC 位移分析[87, ，ITC 技術(shù)為研究蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用過程中結(jié)合自由能的大小提供了簡(jiǎn)單ITC 可以直接測(cè)量生物分子結(jié)合過程中的熱量變化，被廣泛應(yīng)用于生物分子相熱力學(xué)和動(dòng)力學(xué)研究中[89]。此方法靈敏度高、重現(xiàn)性好，還具有原位在線無損

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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碩士論文
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本文編號(hào)：3626353