目的:越來(lái)越多的研究表明載脂蛋白M（apoM）作為高密度脂蛋白（HDL）的組成成分及1-磷酸鞘氨醇（S1P）的生理性載體廣泛地參與了體內(nèi)眾多的病理生理過(guò)程。apoM與內(nèi)皮保護(hù)作用及機(jī)體炎癥反應(yīng)密切相關(guān)。內(nèi)皮型一氧化氮合酶（eNOS）主要存在于內(nèi)皮細(xì)胞中,與內(nèi)皮細(xì)胞的炎癥、血管的舒縮以及血小板粘附聚集等生物過(guò)程緊密相關(guān)。本研究旨在探究apoM是否通過(guò)介導(dǎo)eNOS表達(dá)水平及其活性的變化參與機(jī)體的病理生理過(guò)程。方法:（1）用空載慢病毒和攜帶apoM基因的慢病毒轉(zhuǎn)染人臍靜脈細(xì)胞與肺腺癌細(xì)胞A549的融合細(xì)胞株EA.hy926細(xì)胞,獲得穩(wěn)定表達(dá)的空載慢病毒轉(zhuǎn)染的EA.hy926細(xì)胞(apoM^TgN)和攜帶apoM基因的慢病毒轉(zhuǎn)染的EA.hy926細(xì)胞(apoM^Tg),待細(xì)胞生長(zhǎng)至70%⁸0%的時(shí)候,換用1%的BSA繼續(xù)培養(yǎng)細(xì)胞12小時(shí)后用濃度為10ng/ml的腫瘤壞死因子-α（TNF-α）分別處理上述細(xì)胞12小時(shí),收集細(xì)胞并提取細(xì)胞總RNA,檢測(cè)細(xì)胞eNOS mRNA的表達(dá)水平,比較分析apoM對(duì)eNOS表達(dá)水平的影響。（2）隨機(jī)... 

【文章來(lái)源】：蘇州大學(xué)江蘇省211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：51 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

apoM慢病毒轉(zhuǎn)染EA.926細(xì)胞的效率

圖 2. 過(guò)表達(dá) apoM 對(duì) TNF-α 誘導(dǎo)的 EA.hy926 細(xì)胞 eNOS mRNA 表達(dá)水平的影響3. apoM+/+小鼠及 apoM-/-小鼠在正常情況下及 LPS 誘導(dǎo)的炎癥情況下對(duì) eNOSmRNA 表達(dá)水平的影響如圖所示，apoM+/+小鼠與相應(yīng)對(duì)照組的 apoM-/-小鼠腎臟的 eNOS mRNA 的表達(dá)相比無(wú)差異。采用 10mg/kg的 LPS 處理小鼠 12h 后，apoM+/+小鼠腎臟的 eNOS mRNA的表達(dá)水平較 LPS 處理前顯著升高且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=8，P<0.05），而 apoM+/+小鼠腎臟的 eNOS mRNA 的表達(dá)水平在 LPS 處理前后無(wú)明顯差異。apoM+/+小鼠 LPS處理組與相對(duì)應(yīng)的 apoM-/-小鼠 LPS 處理組相比其腎臟的 eNOS mRNA 的表達(dá)水平顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=8，P<0.05）。雙因素方差分析顯示，apoM 和 LPS對(duì) apoM+/+小鼠的 eNOS mRNA 表達(dá)水平的交互作用不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

apoM+/+小鼠與相應(yīng)對(duì)照組的 apoM-/-小鼠腎臟的 eNOS mRNA 的表達(dá)相比無(wú)差異。采用 10mg/kg的 LPS 處理小鼠 12h 后，apoM+/+小鼠腎臟的 eNOS mRN的表達(dá)水平較 LPS 處理前顯著升高且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=8，P<0.05），而 apoM+小鼠腎臟的 eNOS mRNA 的表達(dá)水平在 LPS 處理前后無(wú)明顯差異。apoM+/+小鼠 LP處理組與相對(duì)應(yīng)的 apoM-/-小鼠 LPS 處理組相比其腎臟的 eNOS mRNA 的表達(dá)水平顯著升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（n=8，P<0.05）。雙因素方差分析顯示，apoM 和 LP對(duì) apoM+/+小鼠的 eNOS mRNA 表達(dá)水平的交互作用不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[4]載脂蛋白M抑制脂多糖介導(dǎo)的核因子-κB及白細(xì)胞介素-1β的表達(dá)[J]. 邵朋朋,羅光華,劉中華,梁云,劉洪堯,王志剛,徐寧,張曉膺.  中華實(shí)驗(yàn)外科雜志. 2015 (08)
[5]泛素化和磷酸化協(xié)同作用調(diào)控蛋白質(zhì)降解[J]. 易艷萍,曹誠(chéng),馬清鈞.  生物技術(shù)通訊. 2006(04)



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