目的:本研究通過體外細胞實驗,驗證青海田鼠型鼠疫菌在感染人和小鼠巨噬細胞后,對細胞吞噬溶酶體抵抗能力是否存在差異。方法:本研究首先通過胞內(nèi)生存實驗比較青海田鼠型鼠疫菌（Y.pestis 201）在人和小鼠巨噬細胞內(nèi)的生存能力差別,再分別用化學熒光和免疫熒光方法觀察田鼠型鼠疫菌與人和小鼠巨噬細胞的溶酶體及其各階段標志物Rab5、Rab7和Lamp1共定位的情況,然后通過蛋白免疫印跡方法檢測田鼠型鼠疫菌感染的人和小鼠巨噬細胞中吞噬溶酶體相關(guān)基因表達產(chǎn)物,如組織蛋白酶（CTSZ、CTSD）、AP1復(fù)合體（AP1S1）、Fe2+通道蛋白（MCOLN1）、Fe2+反向轉(zhuǎn)運蛋白（Slc11a1）的表達情況,以比較田鼠型鼠疫菌在人和小鼠巨噬細胞中對吞噬溶酶體的抵抗能力差異。結(jié)果:胞內(nèi)生存實驗表明Y.pestis 201在U937來源的人巨噬細胞中生存能力較弱,32 h內(nèi)被清除;但是在小鼠巨噬細胞RAW264.7中生存能力較強,32 h存活率約40%。化學熒光染色和免疫熒光實驗表明:Y.pestis 201在U937來源的巨噬細胞中能夠與溶酶體以及溶酶體各階段標志物Rab5、Rab7和Lamp1存在共... 

【文章來源】：南華大學湖南省

【文章頁數(shù)】：87 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

人和小鼠巨噬細胞對田鼠型鼠疫菌的粘附吞噬率比較

21圖3.3 電轉(zhuǎn)pBC-GFP質(zhì)粒的Y. pestis 201鑒定（40×）Fig. 3.3 The identification of Y. pestis 201 transferred pBC-GFP plasmid (40×)3.1.3.2 Y. pestis 201 感染 RAW264.7 細胞和 U937 來源的巨噬細胞后在細胞內(nèi)的生存情況細胞核經(jīng) Hoechst 染色后呈現(xiàn)藍色熒光，綠色為 Y. pestis 201，Y. pestis 201以相同的感染指數(shù)同時感染人和小鼠巨噬細胞。由圖 3.4 可見，Y. pestis 201 在人巨噬細胞中逐漸被清除，而在小鼠巨噬巨噬細胞中則形成可供 Y. pestis 201 復(fù)制的囊泡并能夠長時間生存，不能被清除。結(jié)果與上述生存率曲線相一致。圖3.4 Y. pestis 201在人和小鼠巨噬細胞中的生存情況（63×）Y-U937：Y

圖3.4 Y. pestis 201在人和小鼠巨噬細胞中的生存情況（63×）Y-U937：Y. pestis 201感染的人巨噬細胞；Y-RAW264.7：Y. pestis 201感染的小鼠巨噬細胞Fig. 3.4 The survival situation of Y. pestis 201 in human and mouse macrophages (63×)

【參考文獻】：
期刊論文
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碩士論文
[1]1910-1911年東北鼠疫及防治研究[D]. 王銀.蘇州大學 2005



本文編號：3559031