發(fā)布時(shí)間：2021-12-28 14:54

　　目的：了解BCR-ABL-SEA雙表達(dá)DNA疫苗誘導(dǎo)BALB/c小鼠特異性細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答效應(yīng),為進(jìn)一步開(kāi)發(fā)慢性粒細(xì)胞白血�。–ML）疫苗提供可行性研究資料；研究金黃色葡萄球菌腸毒素A （SEA）對(duì)K562細(xì)胞體外誘導(dǎo)正常人臍帶血單個(gè)核細(xì)胞CD3ζ鏈基因表達(dá)情況,并進(jìn)一步探討SEA增強(qiáng)K562細(xì)胞誘導(dǎo)活化T細(xì)胞的機(jī)制。方法：1.用成功構(gòu)建的重組雙表達(dá)BCR-ABL多肽和SEA多肽質(zhì)粒BCR-ABL-pIRES-SEA（B-P-S）免疫BALB/c小鼠,間隔14d共3次。相同方法用單表達(dá)BCR-ABL多肽或SEA多肽的質(zhì)粒BCR-ABL-pIRES和SEA-pIRES免疫小鼠做對(duì)照。利用CCK-8比色法檢測(cè)誘導(dǎo)后小鼠脾臟T細(xì)胞對(duì)K562細(xì)胞株殺傷活性；流式細(xì)胞術(shù)測(cè)定小鼠脾臟CD4+與CD8+T細(xì)胞表達(dá)情況；ELISA法檢測(cè)小鼠血清中IFN-γ、IL-4生成情況；間接免疫熒光法檢測(cè)血清中抗BCR-ABL抗體；并進(jìn)一步分離小鼠注射部位肌肉,用RT-PCR及免疫組織化學(xué)染色法檢測(cè)目的基因在小鼠骨骼肌中的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)。2.常規(guī)分離4例臍帶血單個(gè)核細(xì)胞,分別與抗CD3單克隆抗體、單純K562細(xì)胞、... 

【文章來(lái)源】：暨南大學(xué)廣東省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：72 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

BCR一ABL融合基因示意圖

圖2DNA疫苗激發(fā)機(jī)體細(xì)胞和體液免疫原理由于DNA疫苗能夠同時(shí)誘導(dǎo)體液和細(xì)胞免疫，而且具備傳統(tǒng)疫苗無(wú)法比擬的諸多優(yōu)點(diǎn)，因此在常規(guī)化療結(jié)束后輔以特異的DNA疫苗是希望有效清除MRD的方法之一。在白血病患者細(xì)胞，多存在由于染色體易位形成的BCR一ABL融合基因，融合蛋白中存在的獨(dú)特氨基酸序列可作為腫瘤特異性抗原，具有潛在的免疫原性，可以成為誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性免疫應(yīng)答的靶點(diǎn)，基于融合基因設(shè)計(jì)的DNA疫苗為白血病的治療帶來(lái)新的希望[23】。Padua等將PML一RAR。融合基因(105bp)與破傷風(fēng)毒素C片段(Frc)融合，設(shè)計(jì)出一種針對(duì)小鼠早幼粒細(xì)胞白血病模型DNA疫苗，最早證實(shí)了以融合蛋白為特異性靶點(diǎn)DNA疫苗可以強(qiáng)烈誘導(dǎo)體內(nèi)細(xì)胞和體液免疫效應(yīng)，顯著提高患病動(dòng)物的生存率，同時(shí)體內(nèi)出現(xiàn)時(shí)間依賴(lài)性的中和抗體和IFN一Y增加，這一實(shí)驗(yàn)就提示APL細(xì)胞表達(dá)的PML一RARa蛋白能作為腫瘤相關(guān)性抗原增強(qiáng)體內(nèi)免疫反應(yīng)效應(yīng)，誘導(dǎo)產(chǎn)生特異性免疫反應(yīng)而發(fā)揮抗白血病效應(yīng)，延長(zhǎng)動(dòng)物

SEA激活T細(xì)胞通路機(jī)制現(xiàn)在研究比較多超抗原是葡萄球菌腸毒素(staphyloceucalenterotoxins，ses)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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博士論文
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本文編號(hào)：3554255