目的利用畢赤酵母表達人乳頭瘤病毒（human papillomavirus,HPV）33型L1病毒樣顆粒（virus-like particles,VLPs）,評價其在小鼠體內(nèi)的免疫原性。方法構(gòu)建HPV33 L1表達質(zhì)粒,電轉(zhuǎn)化畢赤酵母,篩選高表達菌株,15 L發(fā)酵罐發(fā)酵,離子交換和凝膠體積排阻層析分離純化HPV33 L1 VLPs,純化后樣品免疫小鼠,采用假病毒中和試驗檢測小鼠免疫后血清中和抗體滴度。結(jié)果質(zhì)粒HPV33 L1-pPIC3. 5K經(jīng)雙酶切及測序鑒定證明構(gòu)建成功;畢赤酵母表達產(chǎn)物經(jīng)Western blot分析,可見相對分子質(zhì)量約56 000的目的條帶;透射電鏡下可見直徑約60 nm的病毒樣顆粒;純化后的HPV33 L1 VLPs純度可達95%以上;0. 4和0. 04μg HPV33 L1 VLPs免疫后小鼠血清中和抗體幾何平均滴度（geometric mean titer,GMT）分別為3 200和566,差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P <0. 05）。結(jié)論利用畢赤酵母成功表達了HPV33 L1 VLPs,并具有良好的免疫原性。 

【文章來源】：中國生物制品學(xué)雜志. 2019,32(11)CSCD

【文章頁數(shù)】：5 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 菌株、細(xì)胞及質(zhì)粒
    1.2 主要試劑及儀器
    1.3 實驗動物
    1.4 質(zhì)粒的構(gòu)建
    1.5 電轉(zhuǎn)化畢赤酵母感受態(tài)細(xì)胞
    1.6 高表達菌株的篩選
    1.7 Western blot分析
    1.8 蛋白的誘導(dǎo)表達
    1.9 蛋白的純化
    1.1 0 蛋白純度的檢測
    1.1 1 透射電鏡觀察
    1.1 2 動態(tài)光散射分析
    1.1 3 小鼠免疫
    1.1 4 中和抗體滴度的檢測
    1.1 5 統(tǒng)計學(xué)分析
2 結(jié)果
    2.1 質(zhì)粒HPV33 L1-pPIC3.5K的鑒定
    2.2 HPV33 L1高表達菌株的篩選
    2.3透射電鏡觀察
    2.4 蛋白純度
    2.5 動態(tài)光散射分析
    2.6 免疫效果評價
3 討論


【參考文獻】：
期刊論文
[1]我國女性人乳頭瘤病毒（HPV）感染的流行病學(xué)現(xiàn)狀[J]. 單瑋,張濤,張鐵軍,趙根明.  中華疾病控制雜志. 2017(01)



本文編號：3539200