目的建立并優(yōu)化重組小鼠鞘磷脂脂蛋白（PLP）免疫原性多肽片段（PLP139-208）的原核表達(dá)方法。方法構(gòu)建重組質(zhì)粒PLP-pET-32a（+）,利用基因工程技術(shù)將質(zhì)粒轉(zhuǎn)化到BL21（DE3）中,經(jīng)異丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)后,進(jìn)行PLP139-208的原核表達(dá)。為提高多肽片段的獲得量,從誘導(dǎo)時(shí)間、誘導(dǎo)溫度2個(gè)方面進(jìn)行原核表達(dá)條件優(yōu)化。誘導(dǎo)表達(dá)的蛋白多肽經(jīng)Ni-NTA樹脂純化后,用Western blot法進(jìn)行蛋白鑒定。結(jié)果表達(dá)條件優(yōu)化、并經(jīng)Western blot法蛋白鑒定后,確定誘導(dǎo)溫度23℃、誘導(dǎo)時(shí)間20 h、 0.5 mmol/L IPTG作為PLP多肽的最適原核表達(dá)條件。結(jié)論建立小鼠重組PLP139-208蛋白原核表達(dá)方法,為改良EAE動(dòng)物模型的制備方法及研究PLP誘導(dǎo)自身免疫性脫髓鞘病變的機(jī)制奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。 

【文章來源】：細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2019,35(10)北大核心CSCD

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

測(cè)序序列與小鼠PLP編碼序列比對(duì)圖

誘導(dǎo)表達(dá)后重組PLP的SDS-PAGE染色圖

重組PLP純化結(jié)果


本文編號(hào)：3536441