目的通過CRISPR/Cas9獲得UOX基因敲除的小鼠純合品系,為建立高尿酸血小鼠動物模型奠定基礎(chǔ)。方法根據(jù)小鼠UOX基因第三外顯子前后兩個(gè)位點(diǎn)設(shè)計(jì)雙sgRNA,通過PCR、體外轉(zhuǎn)錄和純化獲得sgRNA和Cas9 mRNA。將sgRNA和Cas9 mRNA顯微注射進(jìn)小鼠原核胚后,體外培養(yǎng)至二細(xì)胞胚階段,進(jìn)行胚胎移植至代孕母鼠。F0代小鼠出生后,提取其DNA進(jìn)行電泳分析和測序分析。F0代交配繁殖至F2代獲得UOX缺失的小鼠純合品系。結(jié)果顯微注射sgRNA和Cas m RNA至原核胚,成功獲得50枚囊胚。移植后生育17只幼鼠。其中,有8只小鼠UOX基因缺失突變,突變率為47.06%。成功構(gòu)建了UOX缺失的小鼠純合品系。結(jié)論利用CRISPR/Cas9,成功獲得UOX缺失的小鼠胚胎和純合品系,為CRISPR/Cas9獲得高尿酸血的小鼠動物模型奠定基礎(chǔ)。 

【文章來源】：中外醫(yī)療. 2020,39(07)

【文章頁數(shù)】：4 頁

【部分圖文】：

sgRNA轉(zhuǎn)錄模板瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果

PCR產(chǎn)物測序峰圖

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3530807