研究目的：構(gòu)建LRG47/EBP50和LRG47/EBP50-RFP基因共修飾的恥垢分枝桿菌治療性載體疫苗,使之能靶向進(jìn)入MΦ,以便于后續(xù)從分子和細(xì)胞水平研究其抗Mtb感染的效果和機(jī)制。有望克服潛伏感染、多重耐藥和再燃等結(jié)核病治療難題,為開(kāi)辟一條結(jié)核病防治的新思路奠定理論基礎(chǔ)。研究策略與方法：1.利用RT-PCR從小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞中擴(kuò)增出EBP50基因、LRG47基因分別克隆至pCDNA3.1中,送去測(cè)序。測(cè)序正確后,通過(guò)次序嚴(yán)密的分步克隆,將EBP50基因片段亞克隆入雙啟動(dòng)子真核共表達(dá)質(zhì)粒pBudCE4.1的HindⅢ/BaMHl位點(diǎn)中、將LRG47基因亞克隆入pBudCE4.1的KpnlⅠ/Xhol位點(diǎn)中、分枝桿菌復(fù)制子OriM基因亞克隆入pBudCE4.1的NheI位點(diǎn)中,形成穿梭/共表達(dá)質(zhì)粒pLEM并轉(zhuǎn)染人293T細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)鑒定。通過(guò)RT-PCR和Westernblot對(duì)目標(biāo)基因產(chǎn)物進(jìn)行檢測(cè)。2.利用PCR從pSIREN-DNA-DsRed-Express中擴(kuò)增出RFP基因并克隆至pCDNA3.1的EcoRⅠ/Xba I位點(diǎn)中,形成pCDNA3.1-RFP... 

【文章來(lái)源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：94 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

提取總RNA凝膠電泳分析

pcDNA3.1一EBPS

pcDNA3.1一EBPS

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]Therapeutic DNA vaccines against tuberculosis:a promising but arduous task[J]. LI Jun-ming and ZHU Dao-yin Department of Microbiology and Immunology, Chongqing University of Medical Sciences, Chongqing 400016, China.  Chinese Medical Journal. 2006(13)
[2]無(wú)細(xì)胞恥垢分枝桿菌疫苗對(duì)結(jié)核桿菌感染者的預(yù)防作用研究[J]. 徐苗,羅永艾,陳保文,沈小兵,蘇城,王國(guó)治.  藥品評(píng)價(jià). 2006(02)
[3]恥垢分枝桿菌作為免疫調(diào)節(jié)劑的研究[J]. 徐苗,陳保文,沈小兵,蘇城,羅永艾,王國(guó)治.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2005(09)
[4]內(nèi)皮素-1 10-23脫氧核酶對(duì)離體灌流大鼠心臟急性缺血性心律失常的影響[J]. 潘秀頡,林麗,任安經(jīng),潘燕霞,王偉忠,袁文俊.  心臟雜志. 2004(06)



本文編號(hào)：3525461