研究目的：構(gòu)建LRG47/EBP50和LRG47/EBP50-RFP基因共修飾的恥垢分枝桿菌治療性載體疫苗,使之能靶向進(jìn)入MΦ,以便于后續(xù)從分子和細(xì)胞水平研究其抗Mtb感染的效果和機(jī)制。有望克服潛伏感染、多重耐藥和再燃等結(jié)核病治療難題,為開辟一條結(jié)核病防治的新思路奠定理論基礎(chǔ)。研究策略與方法：1.利用RT-PCR從小鼠巨噬細(xì)胞系RAW264.7細(xì)胞中擴(kuò)增出EBP50基因、LRG47基因分別克隆至pCDNA3.1中,送去測序。測序正確后,通過次序嚴(yán)密的分步克隆,將EBP50基因片段亞克隆入雙啟動子真核共表達(dá)質(zhì)粒pBudCE4.1的HindⅢ/BaMHl位點中、將LRG47基因亞克隆入pBudCE4.1的KpnlⅠ/Xhol位點中、分枝桿菌復(fù)制子OriM基因亞克隆入pBudCE4.1的NheI位點中,形成穿梭/共表達(dá)質(zhì)粒pLEM并轉(zhuǎn)染人293T細(xì)胞中進(jìn)行表達(dá)鑒定。通過RT-PCR和Westernblot對目標(biāo)基因產(chǎn)物進(jìn)行檢測。2.利用PCR從pSIREN-DNA-DsRed-Express中擴(kuò)增出RFP基因并克隆至pCDNA3.1的EcoRⅠ/Xba I位點中,形成pCDNA3.1-RFP... 

【文章來源】：南昌大學(xué)江西省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：94 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

提取總RNA凝膠電泳分析

pcDNA3.1一EBPS

pcDNA3.1一EBPS

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號：3525461