目的:體外分離、純化臍血CD34⁺造血干/祖細胞（CD34⁺細胞）,誘導(dǎo)其在再生絲素膜上向內(nèi)皮細胞分化,并通過對其分化過程中血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）誘導(dǎo)的細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)與轉(zhuǎn)錄活化因子（STAT）活化的研究,初步揭示CD34⁺細胞向內(nèi)皮細胞分化的部分機制。方法:采集新鮮臍血,磁珠分選法（MACS）分離出CD34⁺細胞,分別接種到再生絲素膜（SF）和明膠包被的培養(yǎng)皿上,用含有VEGF和纖維細胞生長因子（bFGF）的M199培養(yǎng)基誘導(dǎo)分化。細胞形態(tài)學(xué)觀察CD34⁺細胞生長情況,流式細胞儀檢測誘導(dǎo)前后內(nèi)皮細胞CD34,CD31及vWF表型,電鏡觀察驗證內(nèi)皮細胞胞漿內(nèi)的Weibel-Palade小體（W-P小體）,并比較不同材料上CD34⁺細胞的貼壁率及向內(nèi)皮細胞分化比率。進一步以絲素蛋白膜為載體培養(yǎng)WI-38人胚肺成纖維細胞,將本科室已構(gòu)建的腺病毒介導(dǎo)的與干細胞內(nèi)皮化密切相關(guān)的VEGF165基因（即Ad-VEGF165- PolyA-promoter-Ang1... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

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【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

細胞分化培養(yǎng)形態(tài)學(xué)觀察(×100)

9圖1-1 免疫磁珠分選前后細胞表面CD34+的表達2.2 細胞分化培養(yǎng)形態(tài)學(xué)觀察剛分離的 CD34+細胞呈圓形，細胞形態(tài)小，不均勻地懸浮分布于培養(yǎng)皿底部；細胞培養(yǎng) 48h 后明膠組和 SF 組的 CD34+均可見細胞貼壁；3d 后有明顯集落形成；7d 后集落形成較多，逐漸增大，開始出現(xiàn)極化細胞；10d 后可見梭形細胞從細胞簇周圍開始生長，梭形的細胞出現(xiàn)典型的線樣排列結(jié)構(gòu)；14d 后內(nèi)皮細胞長滿瓶底并達到增殖高峰，細胞呈“鋪路石”狀排列。兩組細胞的形態(tài)學(xué)觀察無明顯差別（如圖 1-2）。圖1-2 細胞分化培養(yǎng)形態(tài)學(xué)觀察(×100)2.3 CD34+細胞向內(nèi)皮細胞分化的比率及內(nèi)皮細胞的計數(shù)統(tǒng)計情況細胞培養(yǎng) 6、8、10、12、14d 時對膠組和 SF 組培養(yǎng)細胞分別進行計數(shù)，數(shù)據(jù)采用 SAS 軟件分析，明膠組和 SF 組細胞增殖能力無明顯差異，p>0.05；在分化細胞比例方面

細胞平均貼壁率均較高，分別為 90.8％和85.2％，兩組之間比較無差異（如圖 1-3, p>0.05）。圖1-3 不同材料上接種CD34+細胞的48h貼壁率(p>0.05)2.5 流式細胞儀檢測臍血CD34+細胞分化為內(nèi)皮細胞的效率流式細胞術(shù)檢測的結(jié)果表明，剛分離的 CD34+細胞, CD34 陽性表達率為（98.78±1.06）％（如圖 1-1B），CD31 陽性表達率為（14.92±5.21）％（如圖 1-4）；細胞在 SF 和明膠上培養(yǎng) 10d 后，兩組細胞 CD34 陽性表達率分別為（20.51±1.38）％、（17.59±3.11）％（如圖 1-5A,1-5B），CD31 陽性表達率分別為（75.53±4.89）％、（74.59±3.58）％（如圖 1-6A,1-6B），SF 組和明膠組細胞培養(yǎng) 10d 后的 CD34陽性表達率之間及 CD31 陽性表達率之間比較均無差異，p>0.05；在誘導(dǎo) CD34+

【參考文獻】：
期刊論文
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