目的:構(gòu)建家蠅C型凝集素基因（Mdctl）原核表達(dá)體系,對(duì)Mdctl基因及編碼蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。方法:采用生物信息學(xué)方法,分析Mdctl基因及編碼蛋白;將構(gòu)建的pET28a（+）/Mdctl重組表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至大腸桿菌BL21-DE3中,以異丙基硫代半乳糖苷（IPTG）誘導(dǎo)表達(dá)重組蛋白并通過(guò)SDS-PAGE對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分析;Ni-IDA法純化重組蛋白,Western-Blot對(duì)其鑒定。結(jié)果:生物信息學(xué)分析顯示,Mdctl基因開(kāi)放閱讀框全長(zhǎng)333 bp,共編碼110個(gè)氨基酸,理論分子量為1313 kDa,等電點(diǎn)為449,信號(hào)肽位于1～22位氨基酸之間;Mdctl蛋白中存在Clect結(jié)構(gòu)域,屬于C型凝集素超家族;Mdctl重組蛋白在大腸桿菌BL21-DE3中主要以包涵體形式表達(dá),重組蛋白的相對(duì)分子質(zhì)量與Mdctl蛋白兩端融合6×His標(biāo)簽后的總分子量相一致。結(jié)論:成功構(gòu)建Mdctl原核表達(dá)系統(tǒng),并獲得重組蛋白。 

【文章來(lái)源】：貴州醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào). 2020,45(02)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【部分圖文】：

總RNA的瓊脂糖凝膠電泳

pMD19-T/Mdctl重組菌落PCR的瓊脂糖凝膠電泳

Mdctl純化蛋白的鑒定

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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