目的探討單側(cè)腎切除（UNX）小鼠Habu腎炎模型與正常小鼠Habu腎炎模型在腎臟功能、腎臟病理表現(xiàn)及腎小球蛋白絨毛蛋白1（VIL 1）表達等方面的異同及其分子機制。方法將24只6周齡SPF級雄性C57BL/6小鼠（18～20 g）隨機分為2組,實驗組（n=12）接受UNX后通過尾靜脈注射竹葉青蛇毒（HSV）構(gòu)建Habu腎炎模型（HSV-UNX組）,對照組（n=12）接受假手術(shù)后行蛇毒尾靜脈注射構(gòu)建Habu腎炎模型（HSV組）;通過血液生化檢測2組小鼠腎功能水平,并采用過碘酸-雪夫染色觀察2組小鼠腎組織病理改變;進一步通過蛋白質(zhì)組學對二者腎小球蛋白表達量進行分析,篩選出2組間的表達差異蛋白,于體外小鼠系膜細胞中研究差異蛋白對細胞增殖及凋亡的作用及機制。結(jié)果 HSV-UNX組小鼠的血肌酐和尿素氮水平較HSV組顯著升高（均P<0.01）,其腎組織系膜溶解水平高于HSV組（P<0.0001）,系膜增殖水平低于HSV組（P<0.001）;蛋白組學分析及Western blotting證實VIL1在HSV-UNX組小鼠的表達量低于HSV組;在小鼠系膜細胞中,敲低VIL1表達可通過... 

【文章來源】：實驗動物與比較醫(yī)學. 2020,40(01)

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

HSV組與HSV-UNX組小鼠腎組織PAS染色結(jié)果(400×)

HSV組與HSV-UNX組腎小球組織VIL1蛋白表達水平檢測

為進一步明確HSV-UNX模型中系膜溶解修復異常的分子機制，本研究利用蛋白組學方法分析了2個不同模型在蛋白表達方面的差異，篩選出具有顯著表達差異的蛋白。通過信號通路富集分析，本研究證實2組間差異蛋白主要與細胞增殖和凋亡機制密切相關(guān)。如前所述，在腎小球腎炎中,細胞增殖與凋亡是影響系膜增殖與溶解的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因素,結(jié)合2組模型的病理表現(xiàn)差異,本研究進一步表明,細胞增殖與凋亡異常是HSV-UNX模型損傷后修復不良及腎功惡化的主要分子機制。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)，與HSV組相比，VIL1蛋白表達量在HSV-UNX組明顯降低。VIL1是一種細胞骨架蛋白，既往研究表明，VIL1以鈣依賴的方式與肌動蛋白結(jié)合[13],在調(diào)節(jié)肌動蛋白動力學、維持細胞形態(tài)、抗細胞凋亡、細胞增殖和細胞遷移調(diào)節(jié)和上皮-間質(zhì)轉(zhuǎn)化等方面具有重要作用，并可通過上述作用參與肝癌、宮頸癌、結(jié)腸癌等疾病的發(fā)生發(fā)展[14-17]。Decuypere等[18]研究顯示，VIL1與腎小管細胞死亡密切相關(guān)，是急性腎損傷的新型預測因子，但尚未有VIL1在腎小球疾患中作用及機制的研究。本研究則證實，在系膜細胞中,敲除VIL1可增加p21、p27、Bax和caspase 3的表達,抑制細胞增殖,促進細胞凋亡。眾所周知,p21和p27是細胞周期的負調(diào)控因子[19],二者可與周期蛋白依賴性激酶(cyclin-dependent kinases,CDKs)家族中CDK2/4/6結(jié)合并發(fā)揮抑制作用，從而使細胞周期阻滯于G1期，抑制細胞增殖。此外，Bax和p21可通過激活caspase 3誘導線粒體相關(guān)細胞凋亡[20]。既往研究顯示，VIL1在其headpiece域中有一個F-actin結(jié)合位點，可以結(jié)合并切斷F-actin[13]，而VIL1的下調(diào)可能通過與F-actin相互作用來調(diào)控p21、p27、Bax和caspase 3等蛋白表達[21-22]，進而影響p53、ERK和AKT信號通路[23-25]。這些信號通路的異常最終可引發(fā)系膜細胞增殖和凋亡失衡。因此,VIL1的下調(diào)可能通過抑制系膜細胞增殖及促進細胞凋亡,導致系膜溶解修復障礙，最終在UNX術(shù)后Habu腎炎模型的腎功能損傷加劇中發(fā)揮重要作用。圖4 VIL1敲低對小鼠MMCs中caspase 3、Bax、p21及p27蛋白表達的作用


本文編號：3519375