目的建立APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因小鼠,為深入研究SCN2B基因在AD發(fā)生發(fā)展中的作用提供實(shí)驗(yàn)工具。方法將APP/PS1轉(zhuǎn)基因小鼠與SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因小鼠合籠,子代同胞兄妹交配,子代的后代中選取APP/PS1高表達(dá)和SCN2B陰性的小鼠再同胞兄妹交配,并培育。得到的目的基因的小鼠與WT小鼠對照,進(jìn)行表型鑒定。運(yùn)用PCR鑒定子代小鼠尾部組織基因組DNA,用RT-PCR驗(yàn)證Aβ和SCN2B在大腦中的蛋白的表達(dá),通過免疫熒光觀察SCN2B在轉(zhuǎn)基因小鼠神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá),最后用水迷宮在行為學(xué)上對轉(zhuǎn)基因鼠進(jìn)行鑒定。結(jié)果經(jīng)PCR鑒定成功構(gòu)建APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因鼠雜交群體,并擴(kuò)群培育,經(jīng)免疫染色和RT-PCR分析轉(zhuǎn)基因小鼠的Aβ和SCN2B在大腦中的蛋白的表達(dá),發(fā)現(xiàn)Aβ在轉(zhuǎn)基因鼠的海馬和皮質(zhì)中高表達(dá),SCN2B在海馬中幾乎檢測不到,免疫染色也未發(fā)現(xiàn)SCN2B在神經(jīng)系統(tǒng)中的表達(dá)。水迷宮結(jié)果顯示轉(zhuǎn)基因鼠與同月齡野生型（WT）小鼠相比在空間記憶和認(rèn)知差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。結(jié)論成功構(gòu)建APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因小鼠模型,從基因型、組織學(xué)表現(xiàn)到行為... 

【文章來源】：昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2019,40(12)

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

APP/PS1/SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因鼠的基因型檢測Fig.1GenotypingofAPP/PS1+SCN2B-/-miceA:APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因小鼠基因型檢測；1:DNAMarkerDL2000(從上到下分別為:2000bp，1000bp，750bp，500ABSCN

?�，F(xiàn)ounder：APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因組各品系，共4個品系，分別為Founder14、Founder20、Founder32、Founder28。圖1APP/PS1/SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因鼠的基因型檢測Fig.1GenotypingofAPP/PS1+SCN2B-/-miceA:APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因小鼠基因型檢測；1:DNAMarkerDL2000(從上到下分別為:2000bp，1000bp，750bp，500bp，250bp，100bp)。2～6:轉(zhuǎn)基因鼠的鼠尾DNAPCR擴(kuò)增產(chǎn)物，2:Founder14，3:Founder20，4:Founder32，5:Founder28，6:WT。B:RT-PCR測APP-PS1-SCN2B-轉(zhuǎn)基因組各品系小鼠海馬SCN2B的相對表達(dá)量。與WT比較，*P<0.05。圖2APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因小鼠組織學(xué)表型檢測Fig.2HistologicalphenotypedetectionofAPP/PS1+SCN2B-/-miceA、B:分別為Aβ在野生型及APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因小鼠海馬和皮質(zhì)的免疫組化沉積檢測；C、D:分別為APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因小鼠海馬和坐骨神經(jīng)SCN2B免疫染色。WT野生型，F(xiàn)為APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因組各品系。與WT比較，*P<0.05。ABSCN2B的相對表達(dá)量Aβ（IOD×104）Aβ（IOD×104）ABCD10昆明醫(yī)科大學(xué)學(xué)報第40卷

?月自然發(fā)生海馬與皮質(zhì)的AB淀粉樣沉積以及認(rèn)知功能障礙。SCN2B是腦老化的相關(guān)基因[1]，筆者的前期研究發(fā)現(xiàn)SCN2B的mRNA在快速老化小鼠大腦額葉組織中呈現(xiàn)出增齡性表達(dá)上調(diào)的變化趨勢，并且通過制作SCN2B基因Knockdown小鼠模型，發(fā)現(xiàn)SCN2B下調(diào)60.68%通過增加海馬神經(jīng)元棘突的數(shù)量，顯著改善轉(zhuǎn)基因小鼠海馬依賴性的空間認(rèn)知記憶并且有利于易化海馬神經(jīng)元的長時程電勢，進(jìn)而又發(fā)現(xiàn)SCN2BKnockdown可以顯著減少轉(zhuǎn)基因小鼠海馬中APP的表達(dá)及Aβ-41，42的沉積[10，14]，提示SCN2B在AD的發(fā)病機(jī)制中有重要的作用。圖3APP-PS1-SCN2B-轉(zhuǎn)基因組各品系小鼠水迷宮檢測結(jié)果Fig.3ThetestresultsofmicewatermazeinAPP/PS1/-SCN2B-/-TgmiceA1～A4:APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因組各品系小鼠隱蔽平臺實(shí)驗(yàn)逃避潛伏期檢測；B1～B4::APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因組各品系小鼠空間探索試驗(yàn)中的持續(xù)時間。與WT比較，*P<0.05。第12期檀雅欣，等．APP/PS1+SCN2B-/-轉(zhuǎn)基因小鼠模型的建立及鑒定11持續(xù)時間（s）持續(xù)時間（s）逃避潛伏期（s）逃避潛伏期（s）持續(xù)時間（s）持續(xù)時間（s）A1A2A3A4B1B2B3B4對角象限對角象限左邊象限對角象限對角象限右邊象限右邊象限右邊象限右邊象限靶象限靶象限靶象限靶象限左邊象限左邊象限左邊象限逃避潛伏期（s）逃避潛伏期（s）


本文編號：3506373