乙型肝炎病毒S蛋白對人APOAⅡ基因調控及機制
發(fā)布時間：2021-10-29 23:33
乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染可引起急、慢性乙型肝炎,肝硬化,并與原發(fā)性肝細胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）的發(fā)生發(fā)展關系密切。但其致病機制尚未明確。HBs蛋白由HBV編碼的一種包膜蛋白,參與完整HBV Dane顆粒的裝配、球形顆粒（secreted sphere）和管形顆粒（secreted filament）的組裝,大量存在于HBV感染者血清中。研究發(fā)現HBs可影響細胞生理功能,如糖類和脂類代謝,細胞生長和細胞凋亡過程。本課題組前期通過Q-PCR的方法,檢測了16種載脂蛋白（Apo）基因。其中載脂蛋白AII（Apolipoprotein A2,APOAII）在HBV穩(wěn)定表達細胞株HepG2.2.15中低于對照細胞株HepG2,提示HBV可降低APOAII的表達。在此基礎上,進一步討論HBs影響APOAII的轉錄與表達的調控機制,有助于進一步了解HBV相關發(fā)病機理。我們首先在第一部分探討HBV特別是HBs對APOAII mRNA水平及蛋白水平的影響。通過穩(wěn)定表達HBV的細胞株及瞬時轉染含有1.2倍體HBV基因組DNA,進...
【文章來源】：福建醫(yī)科大學福建省
【文章頁數】：69 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
HBV對apoAII轉錄及表達的影響
圖 2 HBs 對 apoAII 轉錄水平及表達水平的影響。腺病毒 AdAd-MHBs、Ad-HBs、Ad-HBc、Ad-HBe、Ad-HBpol、Ad-HBx 和對照腺病毒 分別感染 Hep3B、Huh7 和 HepG2 細胞，感染 72 h 后提取總 RNA 和行 Q- PCR 和 Western blot 檢測 apoAII mRNA 和蛋白的表達。以 β-acwestern blot 的內參，GAPDH 作為 Q- PCR 內參。*表示 P<0.05。2.2 HBs 突變可逆轉 HBV 對 apoAII 轉錄及蛋白表達的抑制作用。為了驗證 HBs 對 APOAII 作用的特異性，我們構建了 HBs 終止突組載體 pRep-1.2HBV-S(–)與 pRep-HBV、pRep-Sal 分別轉染 HepG2 細染后 48h，以 Trizol 抽提細胞總 RNA，RIPA 強裂解液裂解細胞提取通過 real-time PCR 及 western blot 檢測證實（圖 3），HBs 突變能逆對 apoAII 的抑制作用，說明 HBs 的作用具有特異性。
對 apoAII 的轉錄及表達的影響。pRep-HBV轉染組 apoAII 的 mRNA 和蛋白水平。以 β-aH 為 real-time PCR 內參。*表示 P<0.05。 apoAII 基因啟動子活性。II 啟動子全長以及海參（內參）熒光素酶表達pG2 細胞，采用雙報告檢測系統(tǒng)檢測每個轉染組0 和 pRL-SV40 共轉染組作為陰性對照。Ad-H細胞，探討 HBs 是否通過抑制 apoAII 基因啟及表達。由圖 4 可知，apoAII 基因的啟動子而下調，呈劑量效應。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Association between hepatitis B and metabolic syndrome: Current state of the art[J]. Peter Jarcuska,Sylvia Drazilova,Jan Fedacko,Daniel Pella,Martin Janicko. World Journal of Gastroenterology. 2016(01)
[2]Hepatitis B virus infection and coronary atherosclerosis: Results from a population with relatively high prevalence of hepatitis B virus[J]. De-Yan Tong, Xiao-Hua Wang, Si-Dong Xiong, Department of Immunology, Shanghai Medical College of Fudan University, Center for Gene Immunization and Vaccine Research (Shanghai), Shanghai 200032, China Cong-Feng Xu, Ying-Zhen Yang, Shanghai Institute of Cardiovascular Diseases, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai 200032, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(09)
本文編號：3465597
【文章來源】：福建醫(yī)科大學福建省
【文章頁數】：69 頁
【學位級別】：碩士
【部分圖文】：
HBV對apoAII轉錄及表達的影響
圖 2 HBs 對 apoAII 轉錄水平及表達水平的影響。腺病毒 AdAd-MHBs、Ad-HBs、Ad-HBc、Ad-HBe、Ad-HBpol、Ad-HBx 和對照腺病毒 分別感染 Hep3B、Huh7 和 HepG2 細胞，感染 72 h 后提取總 RNA 和行 Q- PCR 和 Western blot 檢測 apoAII mRNA 和蛋白的表達。以 β-acwestern blot 的內參，GAPDH 作為 Q- PCR 內參。*表示 P<0.05。2.2 HBs 突變可逆轉 HBV 對 apoAII 轉錄及蛋白表達的抑制作用。為了驗證 HBs 對 APOAII 作用的特異性，我們構建了 HBs 終止突組載體 pRep-1.2HBV-S(–)與 pRep-HBV、pRep-Sal 分別轉染 HepG2 細染后 48h，以 Trizol 抽提細胞總 RNA，RIPA 強裂解液裂解細胞提取通過 real-time PCR 及 western blot 檢測證實（圖 3），HBs 突變能逆對 apoAII 的抑制作用，說明 HBs 的作用具有特異性。
對 apoAII 的轉錄及表達的影響。pRep-HBV轉染組 apoAII 的 mRNA 和蛋白水平。以 β-aH 為 real-time PCR 內參。*表示 P<0.05。 apoAII 基因啟動子活性。II 啟動子全長以及海參（內參）熒光素酶表達pG2 細胞，采用雙報告檢測系統(tǒng)檢測每個轉染組0 和 pRL-SV40 共轉染組作為陰性對照。Ad-H細胞，探討 HBs 是否通過抑制 apoAII 基因啟及表達。由圖 4 可知，apoAII 基因的啟動子而下調，呈劑量效應。
【參考文獻】：
期刊論文
[1]Association between hepatitis B and metabolic syndrome: Current state of the art[J]. Peter Jarcuska,Sylvia Drazilova,Jan Fedacko,Daniel Pella,Martin Janicko. World Journal of Gastroenterology. 2016(01)
[2]Hepatitis B virus infection and coronary atherosclerosis: Results from a population with relatively high prevalence of hepatitis B virus[J]. De-Yan Tong, Xiao-Hua Wang, Si-Dong Xiong, Department of Immunology, Shanghai Medical College of Fudan University, Center for Gene Immunization and Vaccine Research (Shanghai), Shanghai 200032, China Cong-Feng Xu, Ying-Zhen Yang, Shanghai Institute of Cardiovascular Diseases, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai 200032, China. World Journal of Gastroenterology. 2005(09)
本文編號：3465597
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