乙型肝炎病毒（Hepatitis B virus,HBV）感染可引起急、慢性乙型肝炎,肝硬化,并與原發(fā)性肝細(xì)胞癌（Hepatocellular carcinoma,HCC）的發(fā)生發(fā)展關(guān)系密切。但其致病機(jī)制尚未明確。HBs蛋白由HBV編碼的一種包膜蛋白,參與完整HBV Dane顆粒的裝配、球形顆粒（secreted sphere）和管形顆粒（secreted filament）的組裝,大量存在于HBV感染者血清中。研究發(fā)現(xiàn)HBs可影響細(xì)胞生理功能,如糖類和脂類代謝,細(xì)胞生長和細(xì)胞凋亡過程。本課題組前期通過Q-PCR的方法,檢測了16種載脂蛋白（Apo）基因。其中載脂蛋白AII（Apolipoprotein A2,APOAII）在HBV穩(wěn)定表達(dá)細(xì)胞株HepG2.2.15中低于對照細(xì)胞株HepG2,提示HBV可降低APOAII的表達(dá)。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步討論HBs影響APOAII的轉(zhuǎn)錄與表達(dá)的調(diào)控機(jī)制,有助于進(jìn)一步了解HBV相關(guān)發(fā)病機(jī)理。我們首先在第一部分探討HBV特別是HBs對APOAII mRNA水平及蛋白水平的影響。通過穩(wěn)定表達(dá)HBV的細(xì)胞株及瞬時轉(zhuǎn)染含有1.2倍體HBV基因組DNA,進(jìn)... 

【文章來源】：福建醫(yī)科大學(xué)福建省

【文章頁數(shù)】：69 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HBV對apoAII轉(zhuǎn)錄及表達(dá)的影響

圖 2 HBs 對 apoAII 轉(zhuǎn)錄水平及表達(dá)水平的影響。腺病毒 AdAd-MHBs、Ad-HBs、Ad-HBc、Ad-HBe、Ad-HBpol、Ad-HBx 和對照腺病毒 分別感染 Hep3B、Huh7 和 HepG2 細(xì)胞，感染 72 h 后提取總 RNA 和行 Q- PCR 和 Western blot 檢測 apoAII mRNA 和蛋白的表達(dá)。以 β-acwestern blot 的內(nèi)參，GAPDH 作為 Q- PCR 內(nèi)參。*表示 P<0.05。2.2 HBs 突變可逆轉(zhuǎn) HBV 對 apoAII 轉(zhuǎn)錄及蛋白表達(dá)的抑制作用。為了驗證 HBs 對 APOAII 作用的特異性，我們構(gòu)建了 HBs 終止突組載體 pRep-1.2HBV-S(–)與 pRep-HBV、pRep-Sal 分別轉(zhuǎn)染 HepG2 細(xì)染后 48h，以 Trizol 抽提細(xì)胞總 RNA，RIPA 強(qiáng)裂解液裂解細(xì)胞提取通過 real-time PCR 及 western blot 檢測證實（圖 3），HBs 突變能逆對 apoAII 的抑制作用，說明 HBs 的作用具有特異性。

對 apoAII 的轉(zhuǎn)錄及表達(dá)的影響。pRep-HBV轉(zhuǎn)染組 apoAII 的 mRNA 和蛋白水平。以 β-aH 為 real-time PCR 內(nèi)參。*表示 P<0.05。 apoAII 基因啟動子活性。II 啟動子全長以及海參（內(nèi)參）熒光素酶表達(dá)pG2 細(xì)胞，采用雙報告檢測系統(tǒng)檢測每個轉(zhuǎn)染組0 和 pRL-SV40 共轉(zhuǎn)染組作為陰性對照。Ad-H細(xì)胞，探討 HBs 是否通過抑制 apoAII 基因啟及表達(dá)。由圖 4 可知，apoAII 基因的啟動子而下調(diào)，呈劑量效應(yīng)。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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[2]Hepatitis B virus infection and coronary atherosclerosis: Results from a population with relatively high prevalence of hepatitis B virus[J]. De-Yan Tong, Xiao-Hua Wang, Si-Dong Xiong, Department of Immunology, Shanghai Medical College of Fudan University, Center for Gene Immunization and Vaccine Research (Shanghai), Shanghai 200032, China Cong-Feng Xu, Ying-Zhen Yang, Shanghai Institute of Cardiovascular Diseases, Zhongshan Hospital, Fudan University, Shanghai 200032, China.  World Journal of Gastroenterology. 2005(09)



本文編號：3465597