本文關鍵詞：EBV轉化淋巴母細胞中CXCR4，c-FOS，，F(xiàn)YN，PTPN11基因表達檢測與分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]前期課題組篩選出EBV誘導淋巴細胞轉化的4個關鍵分子,分別是CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因。本課題通過熒光定量PCR和Western blot技術檢測正常人淋巴細胞和體外EBV轉化淋巴母細胞中CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11差異表達情況,驗證前期課題組基因芯片結果,為EB病毒轉化淋巴細胞的分子機制提供實驗依據(jù)。[方法]采集7例健康獻血員外周靜脈血并從中分離出正常人淋巴細胞,用EBV體外誘導淋巴細胞轉化,構建永生化的淋巴母細胞模型。提取EBV轉化淋巴母細胞及配對的正常人淋巴細胞的蛋白及RNA,應用Western blot和熒光定量PCR方法,檢測CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因在7例EBV體外轉化的淋巴母細胞及配對的健康成人正常淋巴細胞中的表達。[結果]本實驗成功建立了7例EBV轉化淋巴母細胞樣細胞系,并檢測了CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因在7例EBV轉化淋巴母細胞及配對的正常人淋巴細胞中的表達情況。CXCR4基因在正常人淋巴細胞及轉化淋巴母細胞中均有表達,轉化細胞CXCR4的m RNA與正常人淋巴細胞相比,表達下調2.718倍,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);Western blot結果顯示,CXCR4在轉化細胞中的蛋白與正常人淋巴細胞相比,表達下調1.894倍,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。c-FOS基因在正常人淋巴細胞及轉化淋巴母細胞中均有表達,轉化細胞中c-FOS的m RNA與正常人淋巴細胞相比,表達下調2.641倍,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);Western blot結果顯示,c-FOS在轉化細胞中的蛋白與正常人淋巴細胞相比,表達下調2.323倍,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。FYN基因在正常人淋巴細胞及轉化淋巴母細胞中均有表達,轉化細胞中FYN的m RNA與正常人淋巴細胞相比,表達下調2.451倍,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);Western blot結果顯示,FYN在轉化細胞中的蛋白與正常人淋巴細胞相比,表達下調2.019倍,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。PTPN11基因在正常人淋巴細胞及轉化淋巴母細胞中均有表達,轉化細胞PTPN11的m RNA與正常人淋巴細胞相比,表達上調2.057倍,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01);Western Blot結果顯示,PTPN11在轉化細胞中的蛋白與正常人淋巴細胞相比,表達上調2.127倍,差異具有統(tǒng)計學意義(P0.01)。[結論]1.CXCR4在轉化淋巴母細胞中的蛋白表達和m RNA轉錄均低于其在正常人淋巴細胞。2.c-FOS在轉化淋巴母細胞中的蛋白表達和m RNA轉錄均低于其在正常人淋巴細胞。3.FYN在轉化淋巴母細胞中的蛋白表達和m RNA轉錄均低于其在正常人淋巴細胞。4.PTPN11在轉化淋巴母細胞中的蛋白表達和m RNA轉錄均高于其在正常人淋巴細胞。
【關鍵詞】：EBV CXCR4 c-FOS FYN PTPN11 淋巴細胞轉化 基因表達
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R3416
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-15
• 第2章 實驗方案15-17
• 第3章 實驗材料與方法17-29
• 3.1 實驗材料17-19
• 3.1.1 主要試劑和耗材17
• 3.1.2 實驗儀器17-18
• 3.1.3 研究對象18-19
• 3.1.4 數(shù)據(jù)處理和分析19
• 3.2 實驗方法19-29
• 3.2.1 淋巴母細胞樣細胞系模型建立、細胞培養(yǎng)及EBV提取19-22
• 3.2.2 熒光定量PCR22-24
• 3.2.3 Western Blot24-29
• 第4章 結果29-39
• 4.1 EBV體外轉化淋巴母細胞29
• 4.2 實時熒光定量PCR檢測EB病毒體外轉化淋巴母細胞及其配對的正常人淋巴細胞中CXCR4, c-FOS, FYN, PTPN11的表達29-34
• 4.2.1 數(shù)據(jù)分析結果29-30
• 4.2.2 β-actin基因結果分析30
• 4.2.3 CXCR4基因結果分析30-31
• 4.2.4 c-FOS基因結果分析31-32
• 4.2.5 FYN基因結果分析32-33
• 4.2.6 PTPN11基因結果分析33-34
• 4.3 Western Blot檢測EB病毒轉化淋巴細胞及其配對的正常人淋巴細胞中CXCR4, c-FOS, FYN, PTPN11蛋白的表達34-39
• 第5章 討論39-45
• 5.1 CXCR4基因39-40
• 5.2 c-FOS基因40-41
• 5.3 FYN基因41-42
• 5.4 PTPN11基因42-45
• 第6章 結論45-47
• 參考文獻47-53
• 文獻綜述53-67
• 參考文獻62-67
• 攻讀碩士學位期間完成、發(fā)表論文情況67-68
• 基金68-69
• 致謝69

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本文編號：345540