本文關(guān)鍵詞：EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中CXCR4，c-FOS，，F(xiàn)YN，PTPN11基因表達(dá)檢測(cè)與分析，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：[目的]前期課題組篩選出EBV誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化的4個(gè)關(guān)鍵分子,分別是CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因。本課題通過(guò)熒光定量PCR和Western blot技術(shù)檢測(cè)正常人淋巴細(xì)胞和體外EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11差異表達(dá)情況,驗(yàn)證前期課題組基因芯片結(jié)果,為EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞的分子機(jī)制提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。[方法]采集7例健康獻(xiàn)血員外周靜脈血并從中分離出正常人淋巴細(xì)胞,用EBV體外誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化,構(gòu)建永生化的淋巴母細(xì)胞模型。提取EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞及配對(duì)的正常人淋巴細(xì)胞的蛋白及RNA,應(yīng)用Western blot和熒光定量PCR方法,檢測(cè)CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因在7例EBV體外轉(zhuǎn)化的淋巴母細(xì)胞及配對(duì)的健康成人正常淋巴細(xì)胞中的表達(dá)。[結(jié)果]本實(shí)驗(yàn)成功建立了7例EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系,并檢測(cè)了CXCR4,c-FOS,FYN,PTPN11基因在7例EBV轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞及配對(duì)的正常人淋巴細(xì)胞中的表達(dá)情況。CXCR4基因在正常人淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中均有表達(dá),轉(zhuǎn)化細(xì)胞CXCR4的m RNA與正常人淋巴細(xì)胞相比,表達(dá)下調(diào)2.718倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);Western blot結(jié)果顯示,CXCR4在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的蛋白與正常人淋巴細(xì)胞相比,表達(dá)下調(diào)1.894倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。c-FOS基因在正常人淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中均有表達(dá),轉(zhuǎn)化細(xì)胞中c-FOS的m RNA與正常人淋巴細(xì)胞相比,表達(dá)下調(diào)2.641倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);Western blot結(jié)果顯示,c-FOS在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的蛋白與正常人淋巴細(xì)胞相比,表達(dá)下調(diào)2.323倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。FYN基因在正常人淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中均有表達(dá),轉(zhuǎn)化細(xì)胞中FYN的m RNA與正常人淋巴細(xì)胞相比,表達(dá)下調(diào)2.451倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);Western blot結(jié)果顯示,FYN在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的蛋白與正常人淋巴細(xì)胞相比,表達(dá)下調(diào)2.019倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。PTPN11基因在正常人淋巴細(xì)胞及轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中均有表達(dá),轉(zhuǎn)化細(xì)胞PTPN11的m RNA與正常人淋巴細(xì)胞相比,表達(dá)上調(diào)2.057倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01);Western Blot結(jié)果顯示,PTPN11在轉(zhuǎn)化細(xì)胞中的蛋白與正常人淋巴細(xì)胞相比,表達(dá)上調(diào)2.127倍,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。[結(jié)論]1.CXCR4在轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中的蛋白表達(dá)和m RNA轉(zhuǎn)錄均低于其在正常人淋巴細(xì)胞。2.c-FOS在轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中的蛋白表達(dá)和m RNA轉(zhuǎn)錄均低于其在正常人淋巴細(xì)胞。3.FYN在轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中的蛋白表達(dá)和m RNA轉(zhuǎn)錄均低于其在正常人淋巴細(xì)胞。4.PTPN11在轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞中的蛋白表達(dá)和m RNA轉(zhuǎn)錄均高于其在正常人淋巴細(xì)胞。
【關(guān)鍵詞】：EBV CXCR4 c-FOS FYN PTPN11 淋巴細(xì)胞轉(zhuǎn)化 基因表達(dá)
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類(lèi)號(hào)】：R3416
【目錄】：

• 摘要4-6
• Abstract6-11
• 第1章 緒論11-15
• 第2章 實(shí)驗(yàn)方案15-17
• 第3章 實(shí)驗(yàn)材料與方法17-29
• 3.1 實(shí)驗(yàn)材料17-19
• 3.1.1 主要試劑和耗材17
• 3.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器17-18
• 3.1.3 研究對(duì)象18-19
• 3.1.4 數(shù)據(jù)處理和分析19
• 3.2 實(shí)驗(yàn)方法19-29
• 3.2.1 淋巴母細(xì)胞樣細(xì)胞系模型建立、細(xì)胞培養(yǎng)及EBV提取19-22
• 3.2.2 熒光定量PCR22-24
• 3.2.3 Western Blot24-29
• 第4章 結(jié)果29-39
• 4.1 EBV體外轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞29
• 4.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)EB病毒體外轉(zhuǎn)化淋巴母細(xì)胞及其配對(duì)的正常人淋巴細(xì)胞中CXCR4, c-FOS, FYN, PTPN11的表達(dá)29-34
• 4.2.1 數(shù)據(jù)分析結(jié)果29-30
• 4.2.2 β-actin基因結(jié)果分析30
• 4.2.3 CXCR4基因結(jié)果分析30-31
• 4.2.4 c-FOS基因結(jié)果分析31-32
• 4.2.5 FYN基因結(jié)果分析32-33
• 4.2.6 PTPN11基因結(jié)果分析33-34
• 4.3 Western Blot檢測(cè)EB病毒轉(zhuǎn)化淋巴細(xì)胞及其配對(duì)的正常人淋巴細(xì)胞中CXCR4, c-FOS, FYN, PTPN11蛋白的表達(dá)34-39
• 第5章 討論39-45
• 5.1 CXCR4基因39-40
• 5.2 c-FOS基因40-41
• 5.3 FYN基因41-42
• 5.4 PTPN11基因42-45
• 第6章 結(jié)論45-47
• 參考文獻(xiàn)47-53
• 文獻(xiàn)綜述53-67
• 參考文獻(xiàn)62-67
• 攻讀碩士學(xué)位期間完成、發(fā)表論文情況67-68
• 基金68-69
• 致謝69

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