發(fā)布時(shí)間：2021-10-11 09:18

　　目的：以重組9型腺相關(guān)病毒（recombinant adeno-associated virus serotyoe9，rAAV9）為載體介導(dǎo)CaMEK基因轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞，觀察是否能增強(qiáng)心肌細(xì)胞ERK1/2通路表達(dá)活性，進(jìn)而減輕心肌細(xì)胞凋亡，促進(jìn)細(xì)胞存活。方法：分離培養(yǎng)乳鼠心肌細(xì)胞，用含不同啟動(dòng)子的rAAV9轉(zhuǎn)染分離所得心肌細(xì)胞，流式細(xì)胞儀及Western blot測(cè)定各組細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率，選擇適宜啟動(dòng)子，并檢測(cè)rAAV9的心肌特異性轉(zhuǎn)染。rAAV9介導(dǎo)CaMEK基因轉(zhuǎn)染心肌細(xì)胞，Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞ERK1/2通路相關(guān)蛋白及轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，免疫熒光定位檢測(cè)ERK1/2通路相關(guān)信號(hào)分子的轉(zhuǎn)位激活。星胞菌素誘導(dǎo)心肌細(xì)胞凋亡，Western blot檢測(cè)各組細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)，Hoechst33342染色從形態(tài)學(xué)上評(píng)價(jià)各組細(xì)胞凋亡狀況。結(jié)果：（1）流式結(jié)果顯示CBA啟動(dòng)子和CMV啟動(dòng)子介導(dǎo)的rAAV9在心肌細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率分別為（91.5±1.0）%和（73.2±1.3）%（P＜0.05），Western blot結(jié)果顯示rAAV9-CBA-eGFP組eGFP蛋白的表達(dá)明顯強(qiáng)于... 

【文章來源】：新疆醫(yī)科大學(xué)新疆維吾爾自治區(qū)

【文章頁數(shù)】：59 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
前言
材料與方法
    1 材料
        1.1 主要儀器設(shè)備
        1.2 主要試劑及材料
        1.3 主要試劑配制
    2 方法
        2.1 原代乳鼠心肌細(xì)胞的分離培養(yǎng)及鑒定
        2.2 含不同啟動(dòng)子的 rAAV9 載體介導(dǎo) eGFP 基因轉(zhuǎn)染乳鼠心肌細(xì)胞表達(dá)效率的差異
        2.3 AAV9-CBA-eGFP 介導(dǎo)的心肌細(xì)胞特異性轉(zhuǎn)染及轉(zhuǎn)染后表達(dá)高峰的測(cè)定
        2.4 AAV9 介導(dǎo) CaMEK 基因轉(zhuǎn)導(dǎo)心肌細(xì)胞 ERK1/2磷酸化水平及轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)的測(cè)定
        2.5 AAV9 介導(dǎo) CaMEK 基因轉(zhuǎn)染減輕星胞菌素（staurosporine，STS）誘導(dǎo)的心肌細(xì)胞凋亡的檢測(cè)
        2.6 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法
結(jié)果
討論
小結(jié)
致謝
參考文獻(xiàn)
綜述
    參考文獻(xiàn)
攻讀碩士期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文
個(gè)人簡(jiǎn)歷
導(dǎo)師評(píng)閱表



本文編號(hào)：3430228