目的·探明鈣離子/鈣調蛋白依賴性蛋白激酶激酶β（CaMKKβ）在白介素4（IL-4）誘導的RAW264.7細胞極化過程中的作用和機制。方法·RT-PCR和ELISA檢測IL-4誘導RAW264.7細胞極化水平,Western blotting測定極化過程中CaMKKβ、AMPK、JAK2、STAT3蛋白表達及磷酸化水平。慢病毒為載體的shRNA穩(wěn)定干擾RAW264.7細胞CaMKKβ表達,RT-PCR和ELISA檢測IL-4誘導下細胞極化水平的改變,Western blotting檢測AMPK、JAK2、STAT3蛋白及磷酸化蛋白的表達。分別特異性阻斷AMPK、JAK2和STAT3蛋白活性,經RT-PCR檢測IL-4誘導下RAW264.7細胞極化水平的改變。結果·IL-4主要誘導RAW264.7細胞向M2型巨噬細胞極化（P<0.05）,且CaMKKβ、AMPK、JAK2、STAT3的磷酸化水平明顯升高（均P<0.05）。shRNA穩(wěn)定干擾RAW264.7細胞CaMKKβ表達后,IL-4促進巨噬細胞向M2型極化作用降低（P<0.05）,且AMPK、JAK2和STAT3的... 

【文章來源】：上海交通大學學報(醫(yī)學版). 2017,37(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1材料和方法
    1.1 主要材料
    1.2 方法
        1.2.1 細胞培養(yǎng)
        1.2.2 穩(wěn)轉細胞株的建立
        1.2.3 Western blotting檢測目的蛋白表達量
        1.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗測定細胞培養(yǎng)上清中目的蛋白分泌水平
        1.2.5 實時定量PCR檢測目的基因m RNA水平
    1.3統(tǒng)計學處理
2結果
    2.1 IL-4誘導巨噬細胞向M2型轉化, Ca MKKβ及下游的AMPK、JAK2、STAT3的磷酸化水平升高
    2.2 慢病毒介導sh RNA穩(wěn)定干擾RAW264.7細胞Ca MKKβ表達后, IL-4誘導巨噬細胞向M2型極化的作用降低, AMPK、JAK2及STAT3的磷酸化水平下降
    2.3 抑制Raw 264.7細胞AMPK活性后, IL-4誘導下M2表型減少, JAK2及STAT3磷酸化水平降低
    2.4 分別特異性阻斷JAK2和STAT3活性, 再經IL-4誘導, 巨噬細胞向M2型極化減少
3討論



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