目的·探明鈣離子/鈣調(diào)蛋白依賴性蛋白激酶激酶β（CaMKKβ）在白介素4（IL-4）誘導(dǎo)的RAW264.7細(xì)胞極化過程中的作用和機(jī)制。方法·RT-PCR和ELISA檢測IL-4誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞極化水平,Western blotting測定極化過程中CaMKKβ、AMPK、JAK2、STAT3蛋白表達(dá)及磷酸化水平。慢病毒為載體的shRNA穩(wěn)定干擾RAW264.7細(xì)胞CaMKKβ表達(dá),RT-PCR和ELISA檢測IL-4誘導(dǎo)下細(xì)胞極化水平的改變,Western blotting檢測AMPK、JAK2、STAT3蛋白及磷酸化蛋白的表達(dá)。分別特異性阻斷AMPK、JAK2和STAT3蛋白活性,經(jīng)RT-PCR檢測IL-4誘導(dǎo)下RAW264.7細(xì)胞極化水平的改變。結(jié)果·IL-4主要誘導(dǎo)RAW264.7細(xì)胞向M2型巨噬細(xì)胞極化（P<0.05）,且CaMKKβ、AMPK、JAK2、STAT3的磷酸化水平明顯升高（均P<0.05）。shRNA穩(wěn)定干擾RAW264.7細(xì)胞CaMKKβ表達(dá)后,IL-4促進(jìn)巨噬細(xì)胞向M2型極化作用降低（P<0.05）,且AMPK、JAK2和STAT3的... 

【文章來源】：上海交通大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版). 2017,37(07)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：10 頁

【文章目錄】：
1材料和方法
    1.1 主要材料
    1.2 方法
        1.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)
        1.2.2 穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的建立
        1.2.3 Western blotting檢測目的蛋白表達(dá)量
        1.2.4 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中目的蛋白分泌水平
        1.2.5 實(shí)時(shí)定量PCR檢測目的基因m RNA水平
    1.3統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
2結(jié)果
    2.1 IL-4誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型轉(zhuǎn)化, Ca MKKβ及下游的AMPK、JAK2、STAT3的磷酸化水平升高
    2.2 慢病毒介導(dǎo)sh RNA穩(wěn)定干擾RAW264.7細(xì)胞Ca MKKβ表達(dá)后, IL-4誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞向M2型極化的作用降低, AMPK、JAK2及STAT3的磷酸化水平下降
    2.3 抑制Raw 264.7細(xì)胞AMPK活性后, IL-4誘導(dǎo)下M2表型減少, JAK2及STAT3磷酸化水平降低
    2.4 分別特異性阻斷JAK2和STAT3活性, 再經(jīng)IL-4誘導(dǎo), 巨噬細(xì)胞向M2型極化減少
3討論



本文編號(hào)：3400968