目的優(yōu)化表達(dá)和純化方式,制備出具有正確空間結(jié)構(gòu)且純度和產(chǎn)量較高的骨質(zhì)疏松疫苗載體Qβ病毒樣顆粒（Qβvirus-like particles,Qβ-VLPs）。方法在基因合成時(shí)刪除A1基因序列中Qβ衣殼蛋白終止密碼子之后的序列,只合成Qβ衣殼蛋白的基因序列。將Qβ衣殼蛋白基因序列克隆到p ET30a載體質(zhì)粒上,用BL21（DE3）、BL21（DE3） p Lys S、Rosetta（DE3）三種不同菌株進(jìn)行蛋白表達(dá),然后用SDS-PAGE和透射電鏡驗(yàn)證是否表達(dá)出Qβ-VLPs的正確結(jié)構(gòu)。設(shè)置2個(gè)蛋白表達(dá)誘導(dǎo)劑IPTG（Isopropylβ-D-1-thiogalactopyranoside,異丙基-β-D-硫代半乳糖苷）濃度和3種菌體破碎方式,分別優(yōu)化蛋白表達(dá)條件和菌體破碎方案,然后將得到的Qβ-VLPs上清液通過(guò)硫酸銨聚沉、高速離心和分子篩分選進(jìn)行Qβ-VLPs的純化。結(jié)果僅BL21（DE3） p Lys S菌株可以表達(dá)出SDS-PAGE中呈現(xiàn)5-6聚體、透射電鏡下呈現(xiàn)25～30 nm球形結(jié)構(gòu)的Qβ-VLPs。使用0. 5 m M濃度的IPTG表達(dá)的Qβ-VLPs產(chǎn)量較0. 2 m ... 

【文章來(lái)源】：武警醫(yī)學(xué). 2019,30(11)

【文章頁(yè)數(shù)】：6 頁(yè)

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 設(shè)計(jì)
    1.2 時(shí)間及地點(diǎn)
    1.3 材料
        1.3.1 菌株與質(zhì)粒
        1.3.2 試劑及儀器
    1.4 實(shí)驗(yàn)方法
        1.4.1 目的質(zhì)粒的擴(kuò)增及小量提取
        1.4.2 Qβ-VLPs蛋白的表達(dá)和鑒定
        1.4.3 BL21(DE3)p LysS菌株表達(dá)條件的優(yōu)化
        1.4.4 菌體破碎方式的優(yōu)化
        1.4.5 Qβ-VLPs蛋白的純化
2 結(jié)果
    2.1 不同菌株表達(dá)Qβ-VLPs結(jié)果
    2.2 Qβ-VLPs表達(dá)條件的優(yōu)化
    2.3 菌體破碎方式對(duì)蛋白產(chǎn)量和純度的影響
    2.4 Qβ-VLPs的純化結(jié)果
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