目的從PD-L1（28-8）濃縮型抗體性能驗(yàn)證角度出發(fā),比較多平臺的染色結(jié)果,旨在建立適宜的免疫組化染色條件,以滿足PD-L1實(shí)驗(yàn)室自建平臺檢測（laboratory developed test, LDT）技術(shù)廣泛運(yùn)用的需求。方法設(shè)計(jì)扁桃體等多種正常組織塊"羊膜卷"對照及高、中、低表達(dá)的腫瘤組織芯片對照,驗(yàn)證并確認(rèn)PD-L1（28-8）在DAKO Omnis（1∶50+Linker）、Roche Ultra（1∶50+Linker）、DAKO ASL（1∶40+Linker）及手工（Manual）（1∶20+Linker）的染色條件,對已知PD-L1陽性的49例非小細(xì)胞肺癌存檔蠟塊進(jìn)行測試,觀察PD-L1（28-8）在上述四種平臺染色的一致性。結(jié)果 DAKO Omnis、Roche Ultra、DAKO ASL和手工（Manual）PD-L1（28-8） LDT表達(dá)例數(shù)為:當(dāng)Cutoff值1%≤TC<50%,陽性例數(shù)分別為12、13、13、14例;Cutoff值TC≥50%時,陽性例數(shù)分別為24、23、23、11例;Cutoff值TC<1%時,在DAKO Omnis、Ro... 

【文章來源】：臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志. 2019,35(11)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

PD-L1(28-8)DAKO ASL48設(shè)備平臺驗(yàn)證結(jié)果，DAKO ASL48(1∶40+Linker)染色

Scheel等[7]研究11種PD-L1 LDT方案中有6種結(jié)果與PD-L1(28-8)和PD-L1(22C3)試劑盒相似。Velcheti等[8]在一項(xiàng)多樣本回顧性研究中發(fā)現(xiàn)，PD-L1 LDT檢測差異無顯著性。Adam等[9]則認(rèn)為LDT與3種(含28-8)標(biāo)準(zhǔn)商業(yè)試劑盒方法相比，具有不同程度的一致性。一項(xiàng)對68個獨(dú)立實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的PD-L1 PharmDx試劑盒與LDT研究比對，LDT具有較高的合格率[10];上述研究均表明基于有效性能驗(yàn)證來確認(rèn)PD-L1的LDT具有可行性[7-10]。本實(shí)驗(yàn)選擇已經(jīng)確診為SP142陽性TC表達(dá)的存檔蠟塊進(jìn)行28-8的LDT檢測，是為了富集可能PD-L1(28-8)陽性病例，從而觀察PD-L1(28-8)LDT檢測在各平臺特異性表達(dá)數(shù)量的一致性。LDT采用具有檢測下限成分(LLOD)的關(guān)鍵組織來評估抗體敏感度,是判定LDT最佳染色條件的依據(jù)[11]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)合NordiQC推薦[12],在性能驗(yàn)證對照環(huán)節(jié),充分考慮低水平抗原(巨噬細(xì)胞)設(shè)計(jì),采用正常多組織對照(肝臟、腎臟、肺、胎盤、扁桃體等)和多點(diǎn)腫瘤芯片的腫瘤細(xì)胞中PD-L1呈高、中、低表達(dá),提前切制裱貼在同張檢測樣本切片上。PD-L1(28-8)質(zhì)量濃度偏低(0.05 μg/mL,Abcam公司),基于需要呈現(xiàn)低倍鏡下可見扁桃體濾泡中巨噬細(xì)胞軟膜狀著色的檢測基線(“金標(biāo)準(zhǔn)”),DAKO ASL48平臺的條件從稀釋度1 ∶50提升至1 ∶40。結(jié)合PD-L1推薦條件以及文獻(xiàn)LDT結(jié)果[5-10,13-14],自動化設(shè)備平臺運(yùn)用Linker增強(qiáng)條件檢測,染色信號可呈多級放大,具有更高的一致性。非DAKO ASL48平臺PD-L1比對時,因各設(shè)備端綁定的二抗檢測體系不同,與一抗結(jié)合的親和力系數(shù)不一樣,所結(jié)合的一抗最適濃度會有變化[15-16]。本實(shí)驗(yàn)PD-L1(28-8) LDT在有Linker的平臺上得到36例共表達(dá),表達(dá)一致性較好(秩相關(guān)系數(shù)r>0.9),具有較高的判讀一致性并與文獻(xiàn)報(bào)道一致[16-17],提示PD-L1(28-8)LDT檢測適用于帶放大擴(kuò)增系統(tǒng)的檢測平臺;手工(Manual)檢測相比設(shè)備平臺陰性例數(shù)過多(24 vs 13),通過定時顯色對比,仍然發(fā)現(xiàn)腫瘤細(xì)胞染色不足,考慮可能存在Linker組份(采用DAKO ASL48平臺信號放大試劑)兼容性問題。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示49例PD-L1(SP142)表達(dá)歸檔病例中出現(xiàn)13例PD-L1(28-8)不表達(dá),與藍(lán)印計(jì)劃觀點(diǎn)一致[13-14],PD-L1(28-8)和PD-L1(SP142)兩者不能替代。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]RNAscope技術(shù)在非小細(xì)胞肺癌PD-1、PD-L1表達(dá)分析中的應(yīng)用價值[J]. 王珊,董麗儒,任會強(qiáng),熊艷杰,劉愛東,唐慧,宋旭東.  臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志. 2018(09)
[2]品質(zhì)管理圈在降低病理科報(bào)告延發(fā)率中的作用[J]. 朱寧,付堯,陳潔宇,樊祥山.  臨床與實(shí)驗(yàn)病理學(xué)雜志. 2017(12)



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