目的:在大多數(shù)真核生物基因中,蛋白質(zhì)編碼序列（外顯子）被非編碼序列（內(nèi)含子）中斷,在細(xì)胞核輸出翻譯成蛋白質(zhì)之前需要移除細(xì)胞核中的內(nèi)含子。由此說(shuō)明,pre-mRNA剪接是大多數(shù)真核生物基因表達(dá)的一個(gè)重要步驟,對(duì)細(xì)胞的生理功能和病理狀態(tài)都有著重要的意義。在近些年的研究中,mRNA水平上的基因表達(dá)通常用傳統(tǒng)的生物化學(xué)方法進(jìn)行監(jiān)測(cè)。然而,這些方法一般只能在體外進(jìn)行檢測(cè)或受到分子特異性的影響,不能實(shí)時(shí)準(zhǔn)確地監(jiān)測(cè)pre-mRNA剪接過程,也不能完全實(shí)現(xiàn)在活體中的pre-mRNA剪接成像的研究,所以開發(fā)理想的分子探針實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)pre-mRNA剪接過程是十分必要的。材料和方法:在本研究中,我們首先在熒光素酶基因閱讀框內(nèi)嵌合了一個(gè)人工內(nèi)含子,構(gòu)建了一個(gè)熒光素酶報(bào)告基因（Luc-intron）,同時(shí)設(shè)立了一個(gè)不含內(nèi)含子的對(duì)照熒光素酶報(bào)告基因（Luc-control）。我們利用慢病毒系統(tǒng)構(gòu)建了A549-luc-intron和A549-luc-control兩種穩(wěn)定的細(xì)胞系,之后我們采用雙色熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)方法檢測(cè)熒光素酶活性在外源藥物異銀杏雙黃酮（ISO）作用下的藥物劑量和時(shí)間的依賴性,并采用RT-PCR對(duì)剪... 

【文章來(lái)源】：西安電子科技大學(xué)陜西省 211工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：84 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

不同內(nèi)含子剪接過程

西安電子科技大學(xué)碩士學(xué)位論文，依賴的 ATP 穩(wěn)定了分支點(diǎn)和 U2 snRNP 之間的相互作用，導(dǎo)致了 U4， snRNP 復(fù)合物的結(jié)合[12,13]，這個(gè)合成體的多個(gè)構(gòu)象重排隨后產(chǎn)生催化活，其中 U1 和 U4 snRNP 釋放；最后，在 5’和 3’剪接位點(diǎn)的分離和套索產(chǎn)后外顯子連接發(fā)生[14,15]，如圖 1.2 所示 pre-mRNA 的剪接機(jī)制。

圖 1.3 雙色熒光素酶報(bào)告系統(tǒng)檢測(cè)機(jī)理素酶基因的優(yōu)點(diǎn)酶基因廣泛應(yīng)用于很多領(lǐng)域，如標(biāo)記基因、標(biāo)記細(xì)胞、標(biāo)記微生基因系統(tǒng)、藥物高通量篩選、活體生物體內(nèi)成像等。技術(shù)相比，熒光素酶基因具有使其更適合成為報(bào)告蛋白的幾個(gè)特需要外部光激發(fā)，并且在熒光素酶底物，ATP，鎂和氧的存在下波長(zhǎng)的光[64]。第二、在熒光素酶底物存在的情況下，熒光素酶的 小時(shí)）允許實(shí)時(shí)測(cè)量，因?yàn)闊晒馑孛覆粫?huì)在含有其他報(bào)告基因、體外熒光素酶濃度與發(fā)射光峰高之間的關(guān)系線性高達(dá) 7-8 個(gè)數(shù)性質(zhì)潛在地允許在活體中熒光素酶報(bào)告基因表達(dá)的靈敏無(wú)創(chuàng)成像體內(nèi)使用熒光素酶蛋白質(zhì)的主要限制是缺乏足夠的靈敏度可用們用于細(xì)胞培養(yǎng)和小而透明的生物體[67,68]。然而，現(xiàn)在已經(jīng)取得平的可見光的若干技術(shù)進(jìn)步。究的主要內(nèi)容


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