目的：探討兔纖維環(huán)沿徑向不同區(qū)域的細(xì)胞形態(tài)、生化組成、基因表達(dá)及生物力學(xué)等方面的差異性。方法：獲取6月齡新西蘭白兔的椎間盤纖維環(huán)組織，將其沿徑向分為內(nèi)、中、外三個區(qū)，經(jīng)膠原酶消化分離出各區(qū)纖維環(huán)原代細(xì)胞，比較各區(qū)細(xì)胞形態(tài)學(xué)差異，檢測各區(qū)細(xì)胞的增殖情況，定量分析各區(qū)細(xì)胞I型膠原（Collagen-I）、II型膠原（Collagen-II）和聚集蛋白聚糖（Aggrecan）的基因表達(dá)，通過H&E、番紅O-固綠染色、及Collagen-I和Collagen-II免疫組化染色考察各區(qū)組織中膠原和蛋白聚糖（PG）的分布，定量檢測各區(qū)組織中DNA、糖胺聚糖（GAG）、羥脯氨酸（HYP）、Collagen-I和Collagen-II的含量，利用細(xì)胞牽引力顯微術(shù)（Cell tractionforce microscope, CTFM）測定各區(qū)細(xì)胞的牽引力，通過納米壓痕和拉伸測試分別從微觀和宏觀方面測定各區(qū)組織的壓應(yīng)力和拉應(yīng)力。結(jié)果：分離并培養(yǎng)得到纖維環(huán)內(nèi)、中、外三區(qū)細(xì)胞，其中內(nèi)區(qū)細(xì)胞主要呈圓形或類軟骨細(xì)胞形態(tài)，外區(qū)細(xì)胞主要呈梭形或類成纖維細(xì)胞形態(tài)，中區(qū)細(xì)胞則具有內(nèi)外區(qū)的混合細(xì)胞形態(tài)；三個區(qū)的細(xì)... 

【文章來源】：蘇州大學(xué)江蘇省 211工程院校

【文章頁數(shù)】：144 頁

【學(xué)位級別】：博士

【部分圖文】：

椎間盤的結(jié)構(gòu)和應(yīng)力環(huán)境

緊貼棘突兩側(cè)骨質(zhì)鈍性分開豎脊肌至橫突，顯露 T10 - L5 椎體，將該段脊柱游離取出，剔除周圍肌肉及韌帶（圖1-1A）。使用 11 號刀片完整取出各節(jié)段椎間盤（圖 1-1B-C），將其放入含 5% 雙抗的 α-MEM 培養(yǎng)液中。待各節(jié)段椎間盤取出后，移至超凈工作臺中，在連續(xù)變倍體視顯微鏡下使用顯微外科手術(shù)剪將髓核移除，并進(jìn)一步剔除纖維環(huán)周圍的筋膜、肌肉、韌帶、骨質(zhì)及軟骨終板，然后將纖維環(huán)按照含水量的多少將組織分成內(nèi)區(qū)、中區(qū)及外區(qū)三組（圖 1-1D-E），分別稱重。圖 1-1 椎間盤纖維環(huán)的提取及分區(qū)。 A：兔 T10-L5 脊柱節(jié)段及其之間的椎間盤；B：切取完整的椎間盤；C：獲得的完整的椎間盤；D：剔除椎間盤周圍組織后分區(qū)前的椎間盤；E：移除髓核（1），纖維環(huán)分為內(nèi)區(qū)（2）、中區(qū)（3）和外區(qū)（4）。2.2 纖維環(huán)內(nèi)、中、外區(qū)細(xì)胞的培養(yǎng)獲得內(nèi)、中、外區(qū)的纖維環(huán)組織后（圖 1-1E），用無菌 PBS 溶液清洗，將其剪成約 1×1×1 mm3

不同彈性模量靜電紡絲聚氨酯纖維支架對兔纖維環(huán)干細(xì)胞分化的m 處水平切斷椎間盤，得到 L5 椎體和 L4-5 椎間盤（圖 1-2A）。將椎間盤和椎蠟中，使椎間盤表面向上（圖 1-2B）。米壓痕測試準(zhǔn)備好的樣品，將其固定于 G200 Agilent 納米壓痕儀的載物臺上（圖 1-2C-D）要測試的纖維環(huán)內(nèi)、中、外區(qū)域，每個區(qū)選擇 10 個測試點(diǎn)（圖 1-2E）。選取ies XP CSM flat punch complex modulus”操作模式，在 10, 5.62, 3.16, 1.78 和 1 赫 nm 的振幅下，使用直徑 215 μm 平壓頭垂直纖維環(huán)的方向進(jìn)行加載。測試環(huán)境在測試間隙向纖維環(huán)滴注少量 PBS 以保持組織的水分。


本文編號：3332443