目的以巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（nested reverse transcription PCR, Nested-RT-PCR）鑒定輪狀病毒型別,并對其適用性進行驗證。方法提取輪狀病毒基因組RNA,以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應（reverse transcription PCR, RT-PCR）擴增輪狀病毒VP7基因序列,再以Nested-RT-PCR擴增各型別輪狀病毒特異性目的基因片段,將擴增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測其基因片段的大小,并與Genbank報道的相應基因序列片段預計大小進行對比,以確定各毒株的型別。分析該方法的特異性、靈敏度及準確性,對Nested-RT-PCR鑒定輪狀病毒型別的適用性進行驗證。結(jié)果 Nested-RT-PCR法可特異性擴增各型別輪狀病毒特異性目的基因片段,所檢測的輪狀病毒型別特異性目的基因片段與Genbank報道的相應基因序列片段大小相符,可用于輪狀病毒型別鑒定。適用性驗證結(jié)果顯示,此方法所用引物特異性好,能特異性擴增相應型別的輪狀病毒目的基因片段;具有較高的靈敏度,可檢出RNA質(zhì)量濃度為0.5 ng/μL的樣本,其檢測靈敏度高于PrimeScriptTM One... 

【文章來源】：微生物學免疫學進展. 2020,48(02)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

Nested-RT-PCR和PrimeScriptTM One Step RT-PCR結(jié)果比對

G3型引物特異性分析

G4型引物特異性分析

【參考文獻】：
期刊論文
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本文編號：3313460