目的以巢式逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（nested reverse transcription PCR, Nested-RT-PCR）鑒定輪狀病毒型別,并對(duì)其適用性進(jìn)行驗(yàn)證。方法提取輪狀病毒基因組RNA,以逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（reverse transcription PCR, RT-PCR）擴(kuò)增輪狀病毒VP7基因序列,再以Nested-RT-PCR擴(kuò)增各型別輪狀病毒特異性目的基因片段,將擴(kuò)增產(chǎn)物經(jīng)瓊脂糖凝膠電泳檢測其基因片段的大小,并與Genbank報(bào)道的相應(yīng)基因序列片段預(yù)計(jì)大小進(jìn)行對(duì)比,以確定各毒株的型別。分析該方法的特異性、靈敏度及準(zhǔn)確性,對(duì)Nested-RT-PCR鑒定輪狀病毒型別的適用性進(jìn)行驗(yàn)證。結(jié)果 Nested-RT-PCR法可特異性擴(kuò)增各型別輪狀病毒特異性目的基因片段,所檢測的輪狀病毒型別特異性目的基因片段與Genbank報(bào)道的相應(yīng)基因序列片段大小相符,可用于輪狀病毒型別鑒定。適用性驗(yàn)證結(jié)果顯示,此方法所用引物特異性好,能特異性擴(kuò)增相應(yīng)型別的輪狀病毒目的基因片段;具有較高的靈敏度,可檢出RNA質(zhì)量濃度為0.5 ng/μL的樣本,其檢測靈敏度高于PrimeScriptTM One... 

【文章來源】：微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2020,48(02)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

Nested-RT-PCR和PrimeScriptTM One Step RT-PCR結(jié)果比對(duì)

G3型引物特異性分析

G4型引物特異性分析

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]有限稀釋法篩選輪狀病毒LD9株純化方法的建立及應(yīng)用[J]. 寇桂英,余黎,朱傳鳳,王名強(qiáng),周旭.  中國新藥雜志. 2012(10)
[2]輪狀病毒基因重配LH9株（G4型）傳代穩(wěn)定性研究[J]. 包紅,胡廣宏,陳漢泉,寇桂英,周旭.  微生物學(xué)免疫學(xué)進(jìn)展. 2009(03)
[3]人輪狀病毒的細(xì)胞培養(yǎng)分離[J]. 白植生,方悅?cè)?吳妙靈,申碩,鄭元豐,靳毅,李文琦,吳明德,趙藝.  病毒學(xué)報(bào). 1985(02)



本文編號(hào)：3313460