目的 構建穩(wěn)定的登革病毒4型Ban18HK20株感染性克隆,為深入研究登革病毒毒力位點及嵌合疫苗研發(fā)提供參考。方法 根據(jù)登革病毒4型Ban18HK20株基因組序列設計特異引物,將病毒全長cDNA分6段進行亞克隆構建,再將其逐一拼接連入高拷貝質(zhì)粒pSPTM中,獲得穩(wěn)定的病毒全長cDNA克隆,以其為模板體外轉(zhuǎn)錄RNA,并將RNA電轉(zhuǎn)染Vero細胞,獲得恢復病毒。通過蝕斑法、間接免疫熒光法、生長動力學試驗、小鼠腦內(nèi)致病力研究對恢復病毒的生物學特性進行鑒定,并利用RT-PCR擴增對傳代病毒進行遺傳穩(wěn)定性研究。結(jié)果 酶切及測序表明感染性克隆構建成功。獲得的恢復病毒在蝕斑形態(tài)、病毒E蛋白表達、生長特征及小鼠腦內(nèi)致病力等生物學特性方面同母本株一致,測序表明恢復病毒基因組序列與母本病毒相同,且遺傳穩(wěn)定。結(jié)論 構建獲得了穩(wěn)定的Ban18HK20感染性克隆,建立了用于登革病毒研究的反向遺傳學技術平臺。 

【文章來源】：中華微生物學和免疫學雜志. 2019,(11)

【文章頁數(shù)】：8 頁

【參考文獻】：
期刊論文
[1]登革2型病毒中國分離株感染性全長cDNA克隆的構建與鑒定[J]. 朱武洋,陳水平,秦成峰,于曼,姜濤,鄧永強,秦鄂德.  軍事醫(yī)學科學院院刊. 2006(02)



本文編號：3310409