目的：上皮細(xì)胞的衰老和轉(zhuǎn)分化都可作為腎功能減退的獨(dú)立危險(xiǎn)因素。已有一些證據(jù)表明短期限食（CR）和模擬限食（CRM）藥物可延緩細(xì)胞衰老和上皮細(xì)胞轉(zhuǎn)分化（EMT），但是關(guān)于他們對(duì)衰老腎臟細(xì)胞衰老和EMT的研究卻極少。本研究集中闡述短期限食和模擬限食藥物對(duì)衰老腎臟細(xì)胞衰老和EMT的作用及機(jī)制。方法：實(shí)驗(yàn)用雄性SD大鼠分為4組。YAL：3月齡，自由飲食；OAL：25月齡，自由飲食；OCR：25月齡，飲食熱量為OAL的60%；OMET：25月齡，自由飲食，同時(shí)給予二甲雙胍300mg/kg/d。8周后，大鼠腎臟用于進(jìn)一步研究。從正常腎組織分離的人原代近端腎小管細(xì)胞（PTC）被用來(lái)進(jìn)行后續(xù)機(jī)制的研究。用高糖（HG）誘導(dǎo)細(xì)胞衰老和EMT的模型，并用二甲雙胍或白藜蘆醇和HG共刺激PTC觀察二者對(duì)衰老和EMT的作用，接著用SiRNA技術(shù)沉默AMPK進(jìn)一步檢測(cè)AMPK-mTOR信號(hào)通路在此過(guò)程中的作用。結(jié)果：短期限食和二甲雙胍能顯著下調(diào)老年大鼠尿蛋白及血清甘油三酯，激活A(yù)MPK-mTOR信號(hào)通路，并腎臟延緩衰老及EMT。高糖可誘導(dǎo)PTC衰老和EMT，伴隨有AMPK-mTOR信號(hào)通路的下調(diào)，且白藜蘆醇和二甲雙... 

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【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

A：WesternBlot：YAL、OAL、OCR、OMET四組p16、p21及β-actin的表達(dá)變化

圖 4.4：A：HG 刺激 PTC 0-48h 細(xì)胞免疫熒光染色結(jié)果（×200）：紅色代表 E-cadherin，綠色代表 α-SMA。B，D，G：Western Blot：HG 刺激 0-48h Zeb1，E-cadherin，α-SMA，p16，p21，AMPK，P-AMPK，mTOR，P-mTOR 及 β-actin 的表達(dá)變化。C，G，H : 用ImageJ 分析各組 Zeb1，E-cadherin，α-SMA，p16，p21，AMPK，P-AMPK，mTOR，P-mTOR 及 β-actin 的灰度值，每組實(shí)驗(yàn)重復(fù)三次，各組 Zeb1，E-cadherin，α-SMA，p16，p21 的灰度值分別與相應(yīng)的 β-actin 的比值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，*表示 p<0.05，即各組與 NG 相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。F：SAFH 染色（×600）：HG 刺激 PTCs 0-48h，核內(nèi)不均一染色質(zhì)越多，證明細(xì)胞衰老程度越重。NG：5.5mmol/L 的葡萄糖。OS：5.5mmol/L的葡萄糖+24.5mmol/L 的甘露醇。HG：30mmol/L 的葡萄糖。4.6 二甲雙胍能延緩高糖誘導(dǎo)的 EMT 和細(xì)胞衰老，并同時(shí)激活A(yù)MPK-mTOR 信號(hào)通路


本文編號(hào)：3298715