目的構建人可溶性生長刺激表達基因2（sST2）蛋白的重組真核表達載體,獲得高純度的人sST2重組蛋白。方法根據人sST2基因序列設計引物,利用RT-PCR技術獲得人sST2基因;構建人sST2-pcDNA3.1-his（-）重組真核表達載體;脂質體法轉染COS7細胞,表達人sST2重組蛋白,并用鎳柱親和層析法純化;用western blot和ELISA法對人sST2重組蛋白進行鑒定。結果 PCR擴增產物用瓊脂糖凝膠電泳分析,結果顯示產物長度與預期一致,約為1 000 bp;同源性比對分析結果顯示,人sST2基因成功插入PGH-T載體;用BamHⅠ和HindⅢ對重組真核表達載體雙酶切后凝膠電泳分析,結果顯示產物電泳位置與預期一致;表達產物經SDS-PAGE電泳結果顯示在相對分子質量（Mr）約為65 000處有一明顯條帶,與預期蛋白質位置一致;western blot鑒定結果顯示人sST2重組蛋白有His標簽,ELISA鑒定結果顯示人sST2重組蛋白有與抗sST2抗體結合的特異性抗原表位。結論通過重組DNA技術成功構建人sST2基因重組真核表達載體,通過蛋白質純化技術成功獲得人sST2重組... 

【文章來源】：臨床檢驗雜志. 2020,38(02)

【文章頁數】：5 頁

【部分圖文】：

人sST2基因PCR擴增產物凝膠電泳分析

人sST2-PGH-T重組載體轉化大腸埃希菌DH5α感受態(tài)后,經菌落PCR鑒定,瓊脂糖凝膠電泳出現陽性條帶。同源比對分析結果顯示人sST2成功插入T載體(只出現1個堿基突變)(見圖2)。2.3 人sST2-pcDNA3.1-his(-)重組真核表達載體鑒定

用BamHⅠ和HindⅢ雙酶切人sST2-PGH-T重組載體和pcDNA3.1-his(-)質粒后瓊脂糖凝膠電泳顯示產物電泳位置與預期一致(見圖3),目的片段膠回收后T4酶連接獲得人sST2-pcDNA3.1-his(-)重組真核表達載體并再次BamHⅠ和HindⅢ雙酶切鑒定。瓊脂糖凝膠電泳結果顯示產物電泳位置與預期一致(見圖4)。圖4 人sST2-pcDNA3.1-his(-)重組表達載體雙酶切產物鑒定

【參考文獻】：
期刊論文
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