目的探討影響Ficoll分離法富集臍帶血（UCB）自然殺傷細(xì)胞（NK）的實(shí)驗(yàn)條件。方法在不同保存溫度、復(fù)溫時(shí)間、Ficoll密度和抗凝劑比例條件下,Ficoll法分離臨床UCB,通過流式檢測NK存活率、富集前后的回收率以及粒細(xì)胞清除率,評(píng)判富集效果。結(jié)果 UCB在4、25、37℃下可保存至7h,隨后UCB中NK存活率和富集回收率、粒細(xì)胞清除率隨時(shí)間延長明顯下降。對(duì)長時(shí)間保存的4℃臍血,可在不影響NK存活率情況下,通過復(fù)溫37℃1h或適度增加Ficoll密度提升回收率。此外,血袋規(guī)格應(yīng)與采集血量相匹配,否則較少血量會(huì)導(dǎo)致預(yù)留抗凝劑在UCB中的濃度變大,也會(huì)降低NK富集回收率。結(jié)論在保持UCB與抗凝劑正常比例情況下,臨床UCB 37℃保存7h內(nèi)進(jìn)行Ficoll分離法富集NK可達(dá)到較好富集效果。 

【文章來源】：成都醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào). 2020,15(01)

【文章頁數(shù)】：7 頁

【部分圖文】：

復(fù)溫對(duì)UCB NK富集的影響

檢測不同時(shí)刻、不同保存溫度下NK存活率，結(jié)果顯示：NK活細(xì)胞數(shù)量在4℃條件下，可持續(xù)保存26h無明顯變化；25、37℃保存至7h無明顯變化，但隨后NK活細(xì)胞數(shù)隨時(shí)間延長而減少，26h時(shí)，25、37℃的NK存活率分別減少至3h的（59.0±4.3）%和（42.5±3.7）%，說明對(duì)NK活性無影響的較好長時(shí)間保存溫度是4℃。檢測不同時(shí)刻、不同保存溫度下，F(xiàn)icoll法分離的單個(gè)核細(xì)胞懸液中NK回收率，結(jié)果顯示：4℃保存條件下，3、7h的NK回收率為100%，但19、26h的回收率呈下降趨勢，26h的回收率下降至（72.2±3.3）%，說明4℃的長時(shí)間保存溫度對(duì)獲得理想NK回收率不利。25℃和37℃保存條件下，3、7、19、26h的NK回收率無明顯變化，接近100%，說明25℃和37℃溫度保存對(duì)NK富集無影響。但UCB超過7h保存，無論哪種保存溫度，其Ficoll分離法富集后的細(xì)胞懸液中粒細(xì)胞殘留比例隨著保存時(shí)間延長而逐漸增加。因此，綜合NK存活率、回收率，UCB只要在7h以內(nèi)Ficoll分離，這3種保存溫度差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）（圖2）。2.3 復(fù)溫時(shí)間的優(yōu)化

為進(jìn)一步探究4℃冷藏的UCB復(fù)溫至37℃多長時(shí)間更有利于NK富集，分別檢測了37℃復(fù)溫0、1、2、3、4hNK存活率以及常規(guī)Ficoll法富集NK回收率和粒細(xì)胞殘留比例情況，結(jié)果顯示：37℃復(fù)溫0～4h各組的UCB NK活細(xì)胞數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明37℃復(fù)溫4h操作對(duì)UCB中NK活性不影響。復(fù)溫1h可將NK細(xì)胞回收率由0h的（65.0±3.5）%提高到（96.0±4.1）%，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.001）。但2、3、4h回收率與1h回收率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），說明37℃復(fù)溫1h已達(dá)回收率最高限。各時(shí)刻富集的細(xì)胞懸液中粒細(xì)胞殘留比例隨著復(fù)溫時(shí)間延長而增加，4h可達(dá)38.15%。結(jié)果表明：對(duì)4℃保存的UCB放置37℃的最佳復(fù)溫時(shí)長為1h（圖3）。2.4 Ficoll密度對(duì)4℃保存的UCB NK富集的影響

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞存活率的方法學(xué)建立[J]. 劉陽,賴翼,李敏惠,楊淑霞,鄭靜,陽泰,李麗梅,鄧勇,張強(qiáng),任榮梅,李錢梅,張帥,鄒強(qiáng),李華.  國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志. 2011(15)



本文編號(hào)：3230344