加味陽和湯對膝骨關節(jié)炎大鼠模型基質金屬蛋白酶調控及軟骨保護作用研究
發(fā)布時間：2021-06-09 20:29
目的:觀察加味陽和湯對軟骨細胞MMP-3,9,13及Col2a調控作用及對碘乙酸誘導KOA模型大鼠的軟骨保護作用。方法:軟骨細胞提取于3周齡SD大鼠關節(jié)軟骨,第三代軟骨細胞加入梯度濃度加味陽和湯干預后使用IL-1β誘導炎癥。MTT檢測加味陽和湯最佳干預濃度。Western Blot檢測MMP-3,9,13及Col2a表達。組織病理學切片KOA大鼠模型軟骨退變情況并行Mankin評分。結果:Western Blot結果示加味陽和湯能有效下調異常增高的MMP-3、9、13并上調Col2a表達。Mankin評分結果提示加味陽和湯能有效延緩退變。結論:加味陽和湯可通過抑制MMPs表達從而保護軟骨。
【文章來源】：江西中醫(yī)藥. 2020,51(03)
【文章頁數】：5 頁
【部分圖文】：
…鏡下觀察軟骨及甲苯胺藍染色結果
·59·江西中醫(yī)藥2020年03月第03期總第51卷第447期●中藥研究●表明造模成功（圖1）。模型組及給藥組均隨干預進程出現(xiàn)不同程度恢復，其中給藥組精神、活動情況改善優(yōu)于模型組�？瞻捉M（4周）…………………………………………………………………………造模組（4周）圖1…造模組與空白組軟骨退變對比2.2…軟骨細胞形態(tài)特征及染色鑒定第二代軟骨細胞72h（4x）……………………第三代軟骨細胞24h（10x）圖2…鏡下觀察軟骨及甲苯胺藍染色結果原代軟骨細胞24h左右即可貼壁，可見少量細胞呈多角形或不規(guī)則狀緩慢生長，傳代后增殖速度變快原代約需6d可傳至下一代，隨后每代需3~4d。第四代后逐漸失去軟骨細胞形態(tài)特征。甲苯胺藍染色如圖2所示，細胞核呈深藍，胞漿及間質呈淡藍色，表明提取及培養(yǎng)所得為軟骨細胞且純度較好，可用于后續(xù)實驗。2.3…MTT比色法篩選最佳干預條件…MTT結果顯示，800μg/mL及1000μg/mL組軟骨細胞增殖度在24h，48h及72h條件下均低于100，200，400μg/mL組。各濃度組在培養(yǎng)48h及72h時，細胞增殖度均低于各自相應濃度組培養(yǎng)24h的細胞增殖度。且48h及72h各濃度組內均出現(xiàn)不同程度軟骨細胞生長抑制（P<0.05）。因此，800μg/mL及1000μg/mL組及48h、72h的培養(yǎng)時長不適用于后續(xù)實驗，故本實驗選取100，200，400μg/mL加味陽和湯干預軟骨細胞培養(yǎng)24h為干預條件（圖3）。圖3…MTT比色法篩選不同濃度加味陽和湯干預軟骨細胞條件2.4…MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a蛋白表達水平比較…IL-1β組MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a表達與空白組均有顯著差異（P<0.001）。100，200，400μg/mL加味陽和湯干預后顯示，加味陽和湯干預24h能降低軟骨細胞內MMP-3、MMP-9及MMP
得為軟骨細胞且純度較好，可用于后續(xù)實驗。2.3…MTT比色法篩選最佳干預條件…MTT結果顯示，800μg/mL及1000μg/mL組軟骨細胞增殖度在24h，48h及72h條件下均低于100，200，400μg/mL組。各濃度組在培養(yǎng)48h及72h時，細胞增殖度均低于各自相應濃度組培養(yǎng)24h的細胞增殖度。且48h及72h各濃度組內均出現(xiàn)不同程度軟骨細胞生長抑制（P<0.05）。因此，800μg/mL及1000μg/mL組及48h、72h的培養(yǎng)時長不適用于后續(xù)實驗，故本實驗選取100，200，400μg/mL加味陽和湯干預軟骨細胞培養(yǎng)24h為干預條件（圖3）。圖3…MTT比色法篩選不同濃度加味陽和湯干預軟骨細胞條件2.4…MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a蛋白表達水平比較…IL-1β組MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a表達與空白組均有顯著差異（P<0.001）。100，200，400μg/mL加味陽和湯干預后顯示，加味陽和湯干預24h能降低軟骨細胞內MMP-3、MMP-9及MMP-13表達，提高Col2a蛋白表達。其中，400μg/mL組相比100μg/mL及200μg/mL組干預效果更顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（圖4，表1）。注：1……溶媒組；2……IL-1β組；3……IL-1β+100μg/mL加味陽和湯組；4…IL-1β+200μg/mL加味陽和湯組；5…IL-1β+400μg/mL加味陽和湯組圖4…不同濃度加味陽和湯對軟骨細胞MMPs及Col2a表達的影響表1…各組MMPs及Col2a指標表達情況（，n=3）組別MMP-3MMP-9MMP-13Col2a溶媒組0.273±0.0390.272±0.0170.242±0.1491.911±0.229模型組2.127±0.288&&&2.016±0.217&&&2.504±0.543&&&0.338±0.157&&&低劑量組1.492±0.159**###1.449±0.167***###1.557±0.199**##0.683±0.138##中劑量組0.7
【參考文獻】：
期刊論文
[1]關節(jié)鏡下觀察加味陽和湯治療膝骨性關節(jié)炎的臨床療效[J]. 鄧文毅,陳崗,楊鳳云,謝品輝,王麗華,鐘世榮. 中國中醫(yī)急癥. 2012(05)
[2]加味陽和湯治療膝骨性關節(jié)炎臨床療效觀察[J]. 陳崗,楊鳳云,王麗華,王力,胡立敏,楊軍平,余揚帆,潘鴻志. 中國中醫(yī)骨傷科雜志. 2009(07)
本文編號：3221264
【文章來源】：江西中醫(yī)藥. 2020,51(03)
【文章頁數】：5 頁
【部分圖文】：
…鏡下觀察軟骨及甲苯胺藍染色結果
·59·江西中醫(yī)藥2020年03月第03期總第51卷第447期●中藥研究●表明造模成功（圖1）。模型組及給藥組均隨干預進程出現(xiàn)不同程度恢復，其中給藥組精神、活動情況改善優(yōu)于模型組�？瞻捉M（4周）…………………………………………………………………………造模組（4周）圖1…造模組與空白組軟骨退變對比2.2…軟骨細胞形態(tài)特征及染色鑒定第二代軟骨細胞72h（4x）……………………第三代軟骨細胞24h（10x）圖2…鏡下觀察軟骨及甲苯胺藍染色結果原代軟骨細胞24h左右即可貼壁，可見少量細胞呈多角形或不規(guī)則狀緩慢生長，傳代后增殖速度變快原代約需6d可傳至下一代，隨后每代需3~4d。第四代后逐漸失去軟骨細胞形態(tài)特征。甲苯胺藍染色如圖2所示，細胞核呈深藍，胞漿及間質呈淡藍色，表明提取及培養(yǎng)所得為軟骨細胞且純度較好，可用于后續(xù)實驗。2.3…MTT比色法篩選最佳干預條件…MTT結果顯示，800μg/mL及1000μg/mL組軟骨細胞增殖度在24h，48h及72h條件下均低于100，200，400μg/mL組。各濃度組在培養(yǎng)48h及72h時，細胞增殖度均低于各自相應濃度組培養(yǎng)24h的細胞增殖度。且48h及72h各濃度組內均出現(xiàn)不同程度軟骨細胞生長抑制（P<0.05）。因此，800μg/mL及1000μg/mL組及48h、72h的培養(yǎng)時長不適用于后續(xù)實驗，故本實驗選取100，200，400μg/mL加味陽和湯干預軟骨細胞培養(yǎng)24h為干預條件（圖3）。圖3…MTT比色法篩選不同濃度加味陽和湯干預軟骨細胞條件2.4…MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a蛋白表達水平比較…IL-1β組MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a表達與空白組均有顯著差異（P<0.001）。100，200，400μg/mL加味陽和湯干預后顯示，加味陽和湯干預24h能降低軟骨細胞內MMP-3、MMP-9及MMP
得為軟骨細胞且純度較好，可用于后續(xù)實驗。2.3…MTT比色法篩選最佳干預條件…MTT結果顯示，800μg/mL及1000μg/mL組軟骨細胞增殖度在24h，48h及72h條件下均低于100，200，400μg/mL組。各濃度組在培養(yǎng)48h及72h時，細胞增殖度均低于各自相應濃度組培養(yǎng)24h的細胞增殖度。且48h及72h各濃度組內均出現(xiàn)不同程度軟骨細胞生長抑制（P<0.05）。因此，800μg/mL及1000μg/mL組及48h、72h的培養(yǎng)時長不適用于后續(xù)實驗，故本實驗選取100，200，400μg/mL加味陽和湯干預軟骨細胞培養(yǎng)24h為干預條件（圖3）。圖3…MTT比色法篩選不同濃度加味陽和湯干預軟骨細胞條件2.4…MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a蛋白表達水平比較…IL-1β組MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a表達與空白組均有顯著差異（P<0.001）。100，200，400μg/mL加味陽和湯干預后顯示，加味陽和湯干預24h能降低軟骨細胞內MMP-3、MMP-9及MMP-13表達，提高Col2a蛋白表達。其中，400μg/mL組相比100μg/mL及200μg/mL組干預效果更顯著，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）（圖4，表1）。注：1……溶媒組；2……IL-1β組；3……IL-1β+100μg/mL加味陽和湯組；4…IL-1β+200μg/mL加味陽和湯組；5…IL-1β+400μg/mL加味陽和湯組圖4…不同濃度加味陽和湯對軟骨細胞MMPs及Col2a表達的影響表1…各組MMPs及Col2a指標表達情況（，n=3）組別MMP-3MMP-9MMP-13Col2a溶媒組0.273±0.0390.272±0.0170.242±0.1491.911±0.229模型組2.127±0.288&&&2.016±0.217&&&2.504±0.543&&&0.338±0.157&&&低劑量組1.492±0.159**###1.449±0.167***###1.557±0.199**##0.683±0.138##中劑量組0.7
【參考文獻】：
期刊論文
[1]關節(jié)鏡下觀察加味陽和湯治療膝骨性關節(jié)炎的臨床療效[J]. 鄧文毅,陳崗,楊鳳云,謝品輝,王麗華,鐘世榮. 中國中醫(yī)急癥. 2012(05)
[2]加味陽和湯治療膝骨性關節(jié)炎臨床療效觀察[J]. 陳崗,楊鳳云,王麗華,王力,胡立敏,楊軍平,余揚帆,潘鴻志. 中國中醫(yī)骨傷科雜志. 2009(07)
本文編號：3221264
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