目的:觀察加味陽和湯對(duì)軟骨細(xì)胞MMP-3,9,13及Col2a調(diào)控作用及對(duì)碘乙酸誘導(dǎo)KOA模型大鼠的軟骨保護(hù)作用。方法:軟骨細(xì)胞提取于3周齡SD大鼠關(guān)節(jié)軟骨,第三代軟骨細(xì)胞加入梯度濃度加味陽和湯干預(yù)后使用IL-1β誘導(dǎo)炎癥。MTT檢測(cè)加味陽和湯最佳干預(yù)濃度。Western Blot檢測(cè)MMP-3,9,13及Col2a表達(dá)。組織病理學(xué)切片KOA大鼠模型軟骨退變情況并行Mankin評(píng)分。結(jié)果:Western Blot結(jié)果示加味陽和湯能有效下調(diào)異常增高的MMP-3、9、13并上調(diào)Col2a表達(dá)。Mankin評(píng)分結(jié)果提示加味陽和湯能有效延緩?fù)俗儭＝Y(jié)論:加味陽和湯可通過抑制MMPs表達(dá)從而保護(hù)軟骨。 

【文章來源】：江西中醫(yī)藥. 2020,51(03)

【文章頁數(shù)】：5 頁

【部分圖文】：

…鏡下觀察軟骨及甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果

·59·江西中醫(yī)藥2020年03月第03期總第51卷第447期●中藥研究●表明造模成功（圖1）。模型組及給藥組均隨干預(yù)進(jìn)程出現(xiàn)不同程度恢復(fù)，其中給藥組精神、活動(dòng)情況改善優(yōu)于模型組�？瞻捉M（4周）…………………………………………………………………………造模組（4周）圖1…造模組與空白組軟骨退變對(duì)比2.2…軟骨細(xì)胞形態(tài)特征及染色鑒定第二代軟骨細(xì)胞72h（4x）……………………第三代軟骨細(xì)胞24h（10x）圖2…鏡下觀察軟骨及甲苯胺藍(lán)染色結(jié)果原代軟骨細(xì)胞24h左右即可貼壁，可見少量細(xì)胞呈多角形或不規(guī)則狀緩慢生長(zhǎng)，傳代后增殖速度變快原代約需6d可傳至下一代，隨后每代需3~4d。第四代后逐漸失去軟骨細(xì)胞形態(tài)特征。甲苯胺藍(lán)染色如圖2所示，細(xì)胞核呈深藍(lán)，胞漿及間質(zhì)呈淡藍(lán)色，表明提取及培養(yǎng)所得為軟骨細(xì)胞且純度較好，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.3…MTT比色法篩選最佳干預(yù)條件…MTT結(jié)果顯示，800μg/mL及1000μg/mL組軟骨細(xì)胞增殖度在24h，48h及72h條件下均低于100，200，400μg/mL組。各濃度組在培養(yǎng)48h及72h時(shí)，細(xì)胞增殖度均低于各自相應(yīng)濃度組培養(yǎng)24h的細(xì)胞增殖度。且48h及72h各濃度組內(nèi)均出現(xiàn)不同程度軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)抑制（P<0.05）。因此，800μg/mL及1000μg/mL組及48h、72h的培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)不適用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，故本實(shí)驗(yàn)選取100，200，400μg/mL加味陽和湯干預(yù)軟骨細(xì)胞培養(yǎng)24h為干預(yù)條件（圖3）。圖3…MTT比色法篩選不同濃度加味陽和湯干預(yù)軟骨細(xì)胞條件2.4…MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a蛋白表達(dá)水平比較…IL-1β組MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a表達(dá)與空白組均有顯著差異（P<0.001）。100，200，400μg/mL加味陽和湯干預(yù)后顯示，加味陽和湯干預(yù)24h能降低軟骨細(xì)胞內(nèi)MMP-3、MMP-9及MMP

得為軟骨細(xì)胞且純度較好，可用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。2.3…MTT比色法篩選最佳干預(yù)條件…MTT結(jié)果顯示，800μg/mL及1000μg/mL組軟骨細(xì)胞增殖度在24h，48h及72h條件下均低于100，200，400μg/mL組。各濃度組在培養(yǎng)48h及72h時(shí)，細(xì)胞增殖度均低于各自相應(yīng)濃度組培養(yǎng)24h的細(xì)胞增殖度。且48h及72h各濃度組內(nèi)均出現(xiàn)不同程度軟骨細(xì)胞生長(zhǎng)抑制（P<0.05）。因此，800μg/mL及1000μg/mL組及48h、72h的培養(yǎng)時(shí)長(zhǎng)不適用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)，故本實(shí)驗(yàn)選取100，200，400μg/mL加味陽和湯干預(yù)軟骨細(xì)胞培養(yǎng)24h為干預(yù)條件（圖3）。圖3…MTT比色法篩選不同濃度加味陽和湯干預(yù)軟骨細(xì)胞條件2.4…MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a蛋白表達(dá)水平比較…IL-1β組MMP-3、MMP-9、MMP-13及Col2a表達(dá)與空白組均有顯著差異（P<0.001）。100，200，400μg/mL加味陽和湯干預(yù)后顯示，加味陽和湯干預(yù)24h能降低軟骨細(xì)胞內(nèi)MMP-3、MMP-9及MMP-13表達(dá)，提高Col2a蛋白表達(dá)。其中，400μg/mL組相比100μg/mL及200μg/mL組干預(yù)效果更顯著，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）（圖4，表1）。注：1……溶媒組；2……IL-1β組；3……IL-1β+100μg/mL加味陽和湯組；4…IL-1β+200μg/mL加味陽和湯組；5…IL-1β+400μg/mL加味陽和湯組圖4…不同濃度加味陽和湯對(duì)軟骨細(xì)胞MMPs及Col2a表達(dá)的影響表1…各組MMPs及Col2a指標(biāo)表達(dá)情況（，n=3）組別MMP-3MMP-9MMP-13Col2a溶媒組0.273±0.0390.272±0.0170.242±0.1491.911±0.229模型組2.127±0.288&&&2.016±0.217&&&2.504±0.543&&&0.338±0.157&&&低劑量組1.492±0.159**###1.449±0.167***###1.557±0.199**##0.683±0.138##中劑量組0.7

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]關(guān)節(jié)鏡下觀察加味陽和湯治療膝骨性關(guān)節(jié)炎的臨床療效[J]. 鄧文毅,陳崗,楊鳳云,謝品輝,王麗華,鐘世榮.  中國(guó)中醫(yī)急癥. 2012(05)
[2]加味陽和湯治療膝骨性關(guān)節(jié)炎臨床療效觀察[J]. 陳崗,楊鳳云,王麗華,王力,胡立敏,楊軍平,余揚(yáng)帆,潘鴻志.  中國(guó)中醫(yī)骨傷科雜志. 2009(07)



本文編號(hào)：3221264