發(fā)布時間：2021-05-21 06:46

　　中樞神經(jīng)內(nèi)在生長活性（intrinsic growth activity）呈發(fā)育依賴性丟失，研究證實發(fā)育成熟的神經(jīng)組織一旦損傷后生長能力很低的原因與神經(jīng)生長發(fā)育的調(diào)控機制有關(guān)。一個新的關(guān)于CNS損傷后軸突再生失敗的假設(shè)是——控制中樞神經(jīng)元生長發(fā)育的基因在成熟的神經(jīng)元中被抑制，以致于神經(jīng)元內(nèi)在生長活性低下，從而在損傷后無法有效的再生。發(fā)育時期的神經(jīng)生長屬于生長因子依賴性生長，在諸多生長因子介導的信號通路中PI3K/Akt這條信號通路被認為是與神經(jīng)生長關(guān)系最密切的。PI3K/Akt信號通路中的作用底物哺乳動物雷帕霉素作用靶點mTOR（mammalian target ofrapamycin）是決定中樞神經(jīng)元內(nèi)在生長活性的一個關(guān)鍵調(diào)控物，mTOR表達水平的高低直接決定了神經(jīng)元生長能力的強弱。而表皮生長因子受體EGFR（Epidermal Growth Factor Receptor）與中樞神經(jīng)發(fā)育關(guān)系密切，且磷酸化的EGFR能夠激活mTOR。以上事實均提示EGFR與中樞神經(jīng)元的發(fā)育及生長有著密切的關(guān)聯(lián)。因此本研究試圖找到EGFR與中樞神經(jīng)元發(fā)育之間的聯(lián)系，以此為切入點，探尋中樞神經(jīng)元內(nèi)在生長... 

【文章來源】：吉林大學吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁數(shù)】：101 頁

【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
前言
第1章 文獻綜述
    1.1 文獻綜述 1
    1.2 文獻綜述 2
第2章 不同發(fā)育階段脊髓組織中 EGFR 和 MTOR 的表達及相關(guān)性研究
    2.1 實驗材料
        2.1.1 實驗動物
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實驗方法
        2.2.1 大鼠脊髓組織的取材
        2.2.2 脊髓組織冰凍切片標本的制備
        2.2.3 脊髓組織冰凍切片的免疫組織化學染色
        2.2.4 脊髓組織總蛋白的提取及蛋白濃度的測定
        2.2.5 Western-blot 檢測脊髓組織中 EGFR 和 mTOR 蛋白的表達
        2.2.6 不同發(fā)育階段脊髓組織總 RNA 的提取及 RT-PCR 實驗
        2.2.7 統(tǒng)計學處理
    2.3 實驗結(jié)果
        2.3.1 不同發(fā)育階段的脊髓組織中 EGFR 和 mTOR 的表達
        2.3.2 PI3K/Akt 信號通路在脊髓組織不同發(fā)育階段的活化狀態(tài)的檢測
        2.3.3 不同發(fā)育階段的大鼠脊髓組織免疫化學染色檢測 EGFR 和mTOR
    2.4 實驗討論
    2.5 小結(jié)
第3章 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)干細胞的培養(yǎng)及向神經(jīng)元誘導分化
    3.1 實驗材料
        3.1.1 實驗動物
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 主要試劑
    3.2 實驗方法
        3.2.1 神經(jīng)干細胞的分離、培養(yǎng)、鑒定
        3.2.2 神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元誘導分化培養(yǎng)與鑒定
        3.2.3 全反式維甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）促進神經(jīng)元分化的實驗
        3.2.4 膜片鉗檢測誘導培養(yǎng)神經(jīng)元的分化程度
    3.3 實驗結(jié)果
        3.3.1 神經(jīng)干細胞原代培養(yǎng)與鑒定
        3.3.2 神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元誘導培養(yǎng)與鑒定
        3.3.3 全反式維甲酸（ATRA）促進神經(jīng)干細胞向神經(jīng)元分化
        3.3.4 膜片鉗檢測培養(yǎng)的神經(jīng)元分化成熟度
    3.4 實驗討論
    3.5 小結(jié)
第4章 不同表達水平的 EGFR 對培養(yǎng)的神經(jīng)元生長能力的影響及機制的探討
    4.1 實驗材料
        4.1.1 實驗對象
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 調(diào)控 EGFR 表達的質(zhì)粒、病毒及細胞株
    4.2 實驗方法
        4.2.1 神經(jīng)元的培養(yǎng)
        4.2.2 慢病毒載體的制備和轉(zhuǎn)導
        4.2.3 western-blot 檢測不同培養(yǎng)條件下神經(jīng)元 tau、β-tubulin、NF、p-Akt~(S473)、p-mTOR~(S2448)蛋白的表達
        4.2.4 雷帕霉素（Rapamycin）對神經(jīng)元毒性實驗
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 pLEGFP-EGFR 和 vshRNA-EGFR 轉(zhuǎn)染效果
        4.3.2 雷帕霉素對培養(yǎng)細胞的毒性實驗
        4.3.3 體外不同 EGFR 表達水平下神經(jīng)元生長能力的檢測
        4.3.4 雷帕霉素（Rapamycin）對體外 EGFR 過表達水平下的神經(jīng)元生長能力的影響
        4.3.5 Rapamycin 對 PI3K/Akt 信號通路的狀態(tài)的影響
    4.4 實驗討論
    4.5 小結(jié)
全文討論
結(jié)論
創(chuàng)新點
參考文獻
博士期間已發(fā)表的論文
博士期間主持的課題
致謝


【參考文獻】：
期刊論文
[1]表皮生長因子及其受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和修復中的作用[J]. 蔣娟,楊雙匯,王秀嬌,潘柏宏.  國際病理科學與臨床雜志. 2013(02)
[2]NEP1-40促進高苯丙氨酸損傷大鼠神經(jīng)元Nogo A表達[J]. 黃成姣,黃麗素,張擁軍,葉軍,李端,顧學范.  基礎(chǔ)醫(yī)學與臨床. 2011(03)
[3]下調(diào)PTEN基因?qū)θX缺血再灌注大鼠神經(jīng)元損傷的保護作用研究[J]. 申崇標,陳力學,劉寶松,周冀英,曾照芳,邵陽.  解放軍醫(yī)學雜志. 2010(07)
[4]Intrinsic control of axon regeneration[J]. Zhigang He F.M. Kirby Neurobiology Center, Children’s Hospital, and Department of Neurology, Harvard Medical School, 300 Longwood Avenue, Boston, MA 02115, USA..  Journal of Biomedical Research. 2010(01)
[5]促成年脊髓再生研究的新方向:提高成年神經(jīng)元內(nèi)在生長能力[J]. 楊萍.  生理科學進展. 2009(01)
[6]LINGO-1多克隆抗體對大鼠脊髓損傷模型干預的可行性分析[J]. 呂俊,徐如祥,法志強,姜曉丹,魯辛,柯以銓,蔡穎謙,杜謀選,鄒雨汐,秦玲莎.  中華神經(jīng)醫(yī)學雜志. 2009 (05)



本文編號：3199247