中樞神經(jīng)內(nèi)在生長(zhǎng)活性（intrinsic growth activity）呈發(fā)育依賴(lài)性丟失，研究證實(shí)發(fā)育成熟的神經(jīng)組織一旦損傷后生長(zhǎng)能力很低的原因與神經(jīng)生長(zhǎng)發(fā)育的調(diào)控機(jī)制有關(guān)。一個(gè)新的關(guān)于CNS損傷后軸突再生失敗的假設(shè)是——控制中樞神經(jīng)元生長(zhǎng)發(fā)育的基因在成熟的神經(jīng)元中被抑制，以致于神經(jīng)元內(nèi)在生長(zhǎng)活性低下，從而在損傷后無(wú)法有效的再生。發(fā)育時(shí)期的神經(jīng)生長(zhǎng)屬于生長(zhǎng)因子依賴(lài)性生長(zhǎng)，在諸多生長(zhǎng)因子介導(dǎo)的信號(hào)通路中PI3K/Akt這條信號(hào)通路被認(rèn)為是與神經(jīng)生長(zhǎng)關(guān)系最密切的。PI3K/Akt信號(hào)通路中的作用底物哺乳動(dòng)物雷帕霉素作用靶點(diǎn)mTOR（mammalian target ofrapamycin）是決定中樞神經(jīng)元內(nèi)在生長(zhǎng)活性的一個(gè)關(guān)鍵調(diào)控物，mTOR表達(dá)水平的高低直接決定了神經(jīng)元生長(zhǎng)能力的強(qiáng)弱。而表皮生長(zhǎng)因子受體EGFR（Epidermal Growth Factor Receptor）與中樞神經(jīng)發(fā)育關(guān)系密切，且磷酸化的EGFR能夠激活mTOR。以上事實(shí)均提示EGFR與中樞神經(jīng)元的發(fā)育及生長(zhǎng)有著密切的關(guān)聯(lián)。因此本研究試圖找到EGFR與中樞神經(jīng)元發(fā)育之間的聯(lián)系，以此為切入點(diǎn)，探尋中樞神經(jīng)元內(nèi)在生長(zhǎng)... 

【文章來(lái)源】：吉林大學(xué)吉林省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

【文章頁(yè)數(shù)】：101 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
Abstract
英文縮略詞表
前言
第1章 文獻(xiàn)綜述
    1.1 文獻(xiàn)綜述 1
    1.2 文獻(xiàn)綜述 2
第2章 不同發(fā)育階段脊髓組織中 EGFR 和 MTOR 的表達(dá)及相關(guān)性研究
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        2.1.2 主要儀器
        2.1.3 主要試劑
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 大鼠脊髓組織的取材
        2.2.2 脊髓組織冰凍切片標(biāo)本的制備
        2.2.3 脊髓組織冰凍切片的免疫組織化學(xué)染色
        2.2.4 脊髓組織總蛋白的提取及蛋白濃度的測(cè)定
        2.2.5 Western-blot 檢測(cè)脊髓組織中 EGFR 和 mTOR 蛋白的表達(dá)
        2.2.6 不同發(fā)育階段脊髓組織總 RNA 的提取及 RT-PCR 實(shí)驗(yàn)
        2.2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理
    2.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        2.3.1 不同發(fā)育階段的脊髓組織中 EGFR 和 mTOR 的表達(dá)
        2.3.2 PI3K/Akt 信號(hào)通路在脊髓組織不同發(fā)育階段的活化狀態(tài)的檢測(cè)
        2.3.3 不同發(fā)育階段的大鼠脊髓組織免疫化學(xué)染色檢測(cè) EGFR 和mTOR
    2.4 實(shí)驗(yàn)討論
    2.5 小結(jié)
第3章 大鼠皮質(zhì)神經(jīng)干細(xì)胞的培養(yǎng)及向神經(jīng)元誘導(dǎo)分化
    3.1 實(shí)驗(yàn)材料
        3.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
        3.1.2 主要儀器
        3.1.3 主要試劑
    3.2 實(shí)驗(yàn)方法
        3.2.1 神經(jīng)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定
        3.2.2 神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元誘導(dǎo)分化培養(yǎng)與鑒定
        3.2.3 全反式維甲酸（all-trans retinoic acid，ATRA）促進(jìn)神經(jīng)元分化的實(shí)驗(yàn)
        3.2.4 膜片鉗檢測(cè)誘導(dǎo)培養(yǎng)神經(jīng)元的分化程度
    3.3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
        3.3.1 神經(jīng)干細(xì)胞原代培養(yǎng)與鑒定
        3.3.2 神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元誘導(dǎo)培養(yǎng)與鑒定
        3.3.3 全反式維甲酸（ATRA）促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞向神經(jīng)元分化
        3.3.4 膜片鉗檢測(cè)培養(yǎng)的神經(jīng)元分化成熟度
    3.4 實(shí)驗(yàn)討論
    3.5 小結(jié)
第4章 不同表達(dá)水平的 EGFR 對(duì)培養(yǎng)的神經(jīng)元生長(zhǎng)能力的影響及機(jī)制的探討
    4.1 實(shí)驗(yàn)材料
        4.1.1 實(shí)驗(yàn)對(duì)象
        4.1.2 主要儀器
        4.1.3 主要試劑
        4.1.4 調(diào)控 EGFR 表達(dá)的質(zhì)粒、病毒及細(xì)胞株
    4.2 實(shí)驗(yàn)方法
        4.2.1 神經(jīng)元的培養(yǎng)
        4.2.2 慢病毒載體的制備和轉(zhuǎn)導(dǎo)
        4.2.3 western-blot 檢測(cè)不同培養(yǎng)條件下神經(jīng)元 tau、β-tubulin、NF、p-Akt~(S473)、p-mTOR~(S2448)蛋白的表達(dá)
        4.2.4 雷帕霉素（Rapamycin）對(duì)神經(jīng)元毒性實(shí)驗(yàn)
    4.3 結(jié)果
        4.3.1 pLEGFP-EGFR 和 vshRNA-EGFR 轉(zhuǎn)染效果
        4.3.2 雷帕霉素對(duì)培養(yǎng)細(xì)胞的毒性實(shí)驗(yàn)
        4.3.3 體外不同 EGFR 表達(dá)水平下神經(jīng)元生長(zhǎng)能力的檢測(cè)
        4.3.4 雷帕霉素（Rapamycin）對(duì)體外 EGFR 過(guò)表達(dá)水平下的神經(jīng)元生長(zhǎng)能力的影響
        4.3.5 Rapamycin 對(duì) PI3K/Akt 信號(hào)通路的狀態(tài)的影響
    4.4 實(shí)驗(yàn)討論
    4.5 小結(jié)
全文討論
結(jié)論
創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
博士期間已發(fā)表的論文
博士期間主持的課題
致謝


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]表皮生長(zhǎng)因子及其受體在中樞神經(jīng)系統(tǒng)損傷和修復(fù)中的作用[J]. 蔣娟,楊雙匯,王秀嬌,潘柏宏.  國(guó)際病理科學(xué)與臨床雜志. 2013(02)
[2]NEP1-40促進(jìn)高苯丙氨酸損傷大鼠神經(jīng)元Nogo A表達(dá)[J]. 黃成姣,黃麗素,張擁軍,葉軍,李端,顧學(xué)范.  基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)與臨床. 2011(03)
[3]下調(diào)PTEN基因?qū)θX缺血再灌注大鼠神經(jīng)元損傷的保護(hù)作用研究[J]. 申崇標(biāo),陳力學(xué),劉寶松,周冀英,曾照芳,邵陽(yáng).  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2010(07)
[4]Intrinsic control of axon regeneration[J]. Zhigang He F.M. Kirby Neurobiology Center, Children’s Hospital, and Department of Neurology, Harvard Medical School, 300 Longwood Avenue, Boston, MA 02115, USA..  Journal of Biomedical Research. 2010(01)
[5]促成年脊髓再生研究的新方向:提高成年神經(jīng)元內(nèi)在生長(zhǎng)能力[J]. 楊萍.  生理科學(xué)進(jìn)展. 2009(01)
[6]LINGO-1多克隆抗體對(duì)大鼠脊髓損傷模型干預(yù)的可行性分析[J]. 呂俊,徐如祥,法志強(qiáng),姜曉丹,魯辛,柯以銓,蔡穎謙,杜謀選,鄒雨汐,秦玲莎.  中華神經(jīng)醫(yī)學(xué)雜志. 2009 (05)



本文編號(hào)：3199247