目的利用慢病毒載體通過正反兩方面調(diào)控Islet-1（Insulin gene enhancer binding protein-1,胰島素增強(qiáng)結(jié)合因子）蛋白的表達(dá)來探討Islet-1因子在C3H10T1/2干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化中的作用;明確這種作用是否為心肌特異性。材料與方法1. Islet-1慢病毒表達(dá)載體的構(gòu)建:利用PCR方法釣取Islet-1基因,將其與pLenO-WPI載體分別進(jìn)行雙酶切。純化酶切產(chǎn)物后進(jìn)行定向連接,其產(chǎn)物轉(zhuǎn)化細(xì)菌感受態(tài)細(xì)胞,對(duì)長出的克隆先進(jìn)行PCR鑒定,其上下游引物分別設(shè)計(jì)在載體和目的基因上,PCR鑒定為陽性的克隆,證明Islet-1基因已經(jīng)定向連入目的載體。再對(duì)PCR鑒定陽性的克隆進(jìn)行測(cè)序和分析比對(duì),比對(duì)正確的即為構(gòu)建成功的融合蛋白表達(dá)質(zhì)粒載體。將構(gòu)建好的融合蛋白表達(dá)載體進(jìn)行超純?nèi)?nèi)毒素抽提,與輔助質(zhì)粒共同感染293T細(xì)胞生產(chǎn)出慢病毒載體。2. Islet-1慢病毒干擾載體的構(gòu)建:針對(duì)小鼠Islet-1基因設(shè)計(jì)3個(gè)RNA干擾（RNAi）靶序列,合成相應(yīng)的短發(fā)卡RNA（shRNA）寡核苷酸序列（oligo）:Sh1、Sh2、Sh3,分別插入經(jīng)酶切后的PLVT... 

【文章來源】：重慶醫(yī)科大學(xué)重慶市

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【文章目錄】：
英漢縮略語名詞對(duì)照
摘要
ABSTRACT
前言
第一部分 小鼠Islet-1 慢病毒表達(dá)載體與干擾載體的構(gòu)建
    前言
    1 材料與方法
    2 結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
第二部分 Islet-1 因子對(duì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化的特異性作用
    前言
    1 材料與方法
    2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3 討論
    參考文獻(xiàn)
全文總結(jié)
文獻(xiàn)綜述
    參考文獻(xiàn)
致謝
攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文及參加的學(xué)術(shù)交流


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
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本文編號(hào)：3174297