發(fā)布時間：2021-05-05 22:36

　　目的:探討不同組織來源間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）分泌的外泌體中Micro RNA（mi RNA）對小鼠急性移植物抗宿主�。╝ Gv HD）發(fā)生發(fā)展的影響。方法:（1）分別從C57BL/6小鼠骨實(shí)質(zhì)和人臍帶組織中分離培養(yǎng)MSC,采用流式細(xì)胞術(shù)鑒定其細(xì)胞表型,并進(jìn)行成脂和成骨的誘導(dǎo)分化。14day后采用油紅O染色檢測其成脂分化能力,堿性磷酸酶（ALP）染色鑒別其成骨分化能力;實(shí)時熒光定量PCR（q-PCR）檢測分化過程中成脂分化因子C/EBPα和PPARγ的表達(dá)以及成骨分化關(guān)鍵轉(zhuǎn)錄因子Osteocalin和Runx2的表達(dá)。進(jìn)一步,采用無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)MSC,收集培養(yǎng)上清,利用外泌體試劑盒分離純化外泌體。采用流式細(xì)胞術(shù)、蛋白免疫印跡（western blot）、納米追蹤分析技術(shù)和透射電鏡等方法,依據(jù)外泌體大小、形態(tài)、膜表面標(biāo)志物鑒定分離獲得的外泌體,并對外泌體的mi RNA進(jìn)行測序,結(jié)合生物信息學(xué)分析,選擇保守性強(qiáng)且高表達(dá)的mi RNA-223-3p（mi R-223-3p）進(jìn)行進(jìn)一步的研究。（2）以正常C57BL/6為受體小鼠,由尾靜脈輸注射小鼠骨實(shí)質(zhì)來源MSC（mb MSC）,48h后采集... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)安徽省

【文章頁數(shù)】：86 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
英文縮略語表
中文摘要
Abstract
1 前言
2 材料與方法
    2.1 實(shí)驗(yàn)材料
        2.1.1 主要材料和試劑
        2.1.2 主要設(shè)備和軟件
        2.1.3 實(shí)驗(yàn)動物
        2.1.4 試劑配制
    2.2 實(shí)驗(yàn)方法
        2.2.1 人臍帶來源的MSC和小鼠骨實(shí)質(zhì)來源的MSC的分離培養(yǎng)和鑒定
        2.2.2 兩種不同來源MSC外泌體的分離鑒定與測序
    2.3 正常C57BL/6小鼠移植小鼠骨實(shí)質(zhì)來源的MSC
    2.4 huMSC外泌體與HUVEC共培養(yǎng)
    2.5 miR-223-3pmimic瞬時轉(zhuǎn)染HUVEC
    2.6 miR-223-3p治療小鼠aGvHD
        2.6.1 建立小鼠aGVHD模型
        2.6.2 miR-223-3p對小鼠aGvHD的療效檢測
    2.7 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析
3 實(shí)驗(yàn)結(jié)果
    3.1 小鼠骨實(shí)質(zhì)來源MSC的分離培養(yǎng)與鑒定
    3.2 人臍帶來源MSC的分離培養(yǎng)與鑒定
    3.3 小鼠骨實(shí)質(zhì)來源MSC外泌體的分離純化與鑒定
    3.4 人臍帶來源MSC外泌體的分離純化與鑒定
    3.5 mbMSC和huMSC外泌體的miRNA測序結(jié)果
    3.6 C57BL/6小鼠移植MSC后血清外泌體的miR-223-3p表達(dá)升高
    3.7 外泌體通過miR-223-3p調(diào)控靶基因ICAM-1的表達(dá)
    3.8 外源合成miR-223-3pmimic可抑制HUVEC的ICAM-1表達(dá)
    3.9 miR-223-3p可減輕小鼠造血干細(xì)胞移植后早期aGvHD的發(fā)生
討論
結(jié)論
本論文的創(chuàng)新點(diǎn)
參考文獻(xiàn)
附錄
致謝
綜述
    參考文獻(xiàn)


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]外泌小體在白血病細(xì)胞和骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞交叉對話中的作用[J]. 楊雅芝,張小燕,房麗君,萬倩,李劍.  中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志. 2017(04)
[2]Mesenchymal stem cells-derived exosomal microRNAs contribute to wound inflammation[J]. Dongdong Ti,Haojie Hao,Xiaobing Fu,Weidong Han.  Science China（Life Sciences）. 2016(12)



本文編號：3170711