背景:大量研究表明,循環(huán)中LDL-C水平升高,是引發(fā)動脈粥樣硬化及其相關(guān)心血管疾病的重要危險因素。目前廣泛用于臨床上降脂的他汀類藥物,并不能將所有人群血清LDL-C降至理想水平并有效防治心血管疾病。以此為背景,國內(nèi)外掀起了抗前蛋白轉(zhuǎn)化酶枯草溶菌素9（proprotein convertase subtilisin/kexin type 9,PCSK9）單克隆抗體降脂藥物的研發(fā)熱潮。目前,尚沒有公開發(fā)表可直接應(yīng)用于PCSK9單抗研發(fā)生產(chǎn)過程的抗原結(jié)合活性和生物學(xué)活性檢測方法。目的:本研究擬建立PCSK9單克隆抗體抗原結(jié)合活性和生物學(xué)活性測定方法,用于PCSK9單抗藥物研究開發(fā)過程中的活性質(zhì)量控制工作,為同類單克隆抗體藥物活性方法的開發(fā)提供借鑒。方法:1、在本實驗室前期研究的基礎(chǔ)上,經(jīng)發(fā)酵、純化,得到抗體蛋白原液。分別采用CIEF、CE-SDS、紫外分光光度法、凝膠限度檢查法、酸度計法等方法測定原液的等電點、純度、含量、雜質(zhì)（蛋白A和內(nèi)毒素）和PH值,對其質(zhì)量進(jìn)行檢定。2、根據(jù)間接ELISA法的實驗步驟,依次考察三個關(guān)鍵實驗因素:1)三種二抗:HRP-山羊抗人IgG Fc、HRP-山羊抗人... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：77 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【文章目錄】：
中文摘要
Abstract
縮略語/符號說明
前言
    研究現(xiàn)狀、成果
    研究目的、方法
一、PCSK9單克隆抗體的表達(dá)、純化及質(zhì)量分析
    1.1 對象和方法
        1.1.1 主要試劑
        1.1.2 主要設(shè)備及耗材
        1.1.3 實驗方法
    1.2 結(jié)果
        1.2.1 發(fā)酵表達(dá)結(jié)果
        1.2.2 純化結(jié)果
        1.2.3 質(zhì)量分析結(jié)果
    1.3 討論
    1.4 小結(jié)
二、抗原結(jié)合活性檢測方法的建立
    2.1 對象與方法
        2.1.1 主要試劑
        2.1.2 主要儀器及關(guān)鍵耗材
        2.1.3 主要試劑配制
        2.1.4 實驗方法
    2.2 結(jié)果
        2.2.1 關(guān)鍵實驗條件確定
        2.2.2 方法驗證結(jié)果
    2.3 討論
        2.3.1 間接ELISA法
        2.3.2 包被體系選擇
        2.3.3 方法驗證
    2.4 小結(jié)
三、生物學(xué)活性檢測方法的建立
    3.1 對象和方法
        3.1.1 細(xì)胞株
        3.1.2 主要試劑
        3.1.3 主要設(shè)備及關(guān)鍵耗材
        3.1.4 主要溶液配制
        3.1.5 實驗方法
    3.2 結(jié)果
        3.2.1 細(xì)胞培養(yǎng)結(jié)果
        3.2.2 關(guān)鍵實驗條件選擇確定
        3.2.3 方法驗證結(jié)果
    3.3 討論
        3.3.1 細(xì)胞要求
        3.3.2 關(guān)鍵實驗條件探索
        3.3.3 方法驗證
    3.4 小結(jié)
四、兩種活性檢測方法的應(yīng)用
    4.1 對象和方法
        4.1.1 實驗試劑
        4.1.2 主要設(shè)備及關(guān)鍵耗材
        4.1.3 主要試劑配制
        4.1.4 實驗方法
    4.2 結(jié)果
        4.2.1 三批PCSK9單克隆抗體抗原結(jié)合活性檢測結(jié)果
        4.2.2 三批PCSK9單克隆抗體生物學(xué)活性檢測結(jié)果
    4.3 討論
    4.4 小結(jié)
結(jié)論
參考文獻(xiàn)
發(fā)表論文和參加科研情況說明
綜述 PCSK9靶向降脂藥物的研究現(xiàn)狀以及未來的前景分析
    綜述參考文獻(xiàn)
致謝
個人簡歷


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]《中國心血管病報告2017》概要[J]. 陳偉偉,高潤霖,劉力生,朱曼璐,王文,王擁軍,吳兆蘇,李惠君,顧東風(fēng),楊躍進(jìn),鄭哲,蔣立新,胡盛壽.  中國循環(huán)雜志. 2018(01)
[2]五種常見老年慢性疾病住院醫(yī)療費用調(diào)查分析[J]. 劉述益,曹穎,李勇.  四川醫(yī)學(xué). 2017(11)
[3]中國抗體藥物產(chǎn)業(yè)現(xiàn)狀與發(fā)展前景[J]. 馬杉姍,馬素永,趙廣榮.  中國生物工程雜志. 2015(12)
[4]單克隆抗體類生物治療藥物研究進(jìn)展[J]. 王蘭,朱磊,徐剛領(lǐng),高凱.  中國藥學(xué)雜志. 2014(23)
[5]血脂與心血管疾病關(guān)系的研究進(jìn)展[J]. 解武祥,武陽豐.  中國醫(yī)學(xué)前沿雜志(電子版). 2012(12)
[6]重組人骨形成蛋白-2的質(zhì)量控制[J]. 史新昌,韓春梅,李響,劉蘭,丁有學(xué),饒春明.  中國生物制品學(xué)雜志. 2008(07)
[7]生物素-親和素標(biāo)記技術(shù)[J]. 孔令青,李勇,高洪,嚴(yán)玉霖.  動物醫(yī)學(xué)進(jìn)展. 2008(04)
[8]生物素——親和素系統(tǒng)及其應(yīng)用[J]. 徐榮臻.  微生物學(xué)免疫學(xué)譯刊. 1987(03)



本文編號：3169616