目的探討鞘氨醇激酶-1（SphK1）對熱聯(lián)合內(nèi)毒素（LPS）打擊小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞（PMVECs）通透性的影響。方法分離培養(yǎng)并鑒定PMVECs,建立熱聯(lián)合LPS雙重打擊PMVECs模型。將PMVECs細(xì)胞分為對照組、熱打擊組（HS組）、內(nèi)毒素打擊組（LPS組）及熱聯(lián)合內(nèi)毒素打擊組（HS+LPS組）,采用Westernblotting檢測各組細(xì)胞2種鞘氨醇激酶亞型（SphK1/2）、3種1-磷酸鞘氨醇膜受體（S1PR1/2/3）,以及相關(guān)緊密連接蛋白如閉合蛋白（occludin）、閉鎖小帶蛋白1（ZO-1）的表達(dá),熒光定量PCR檢測SphK及S1PRmRNA的表達(dá)。將細(xì)胞分為對照組、HS+LPS組及DMS預(yù)處理熱聯(lián)合內(nèi)毒素打擊組（HS+LPS+DMS組）,采用SphK活性檢測試劑盒檢測酶活性,CCK-8試劑盒檢測細(xì)胞活力,EVOM跨膜電阻測量儀檢測細(xì)胞跨上皮電阻（TEER）,并觀察特異性抑制SphK1表達(dá)對細(xì)胞活力和通透性的影響。結(jié)果熱聯(lián)合內(nèi)毒素打擊后,細(xì)胞SphK1和S1PR3蛋白、mRNA表達(dá)及酶活性水平與正常對照組比較明顯上升（P<0.01）,細(xì)胞活力、TEER值、緊密連接... 

【文章來源】：解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2019,44(12)北大核心CSCD

【文章頁數(shù)】：6 頁

【文章目錄】：
1 材料與方法
    1.1 主要材料及試劑
    1.2 小鼠肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞（pulmonary microvascular endothelial cells,PMVECs）的分離培養(yǎng)及鑒定
    1.3 細(xì)胞分組及處理
    1.4 SphK1/2、S1PR1/2/3蛋白表達(dá)水平檢測
    1.5 SphK1/2、S1PR1/2/3 mRNA表達(dá)水平檢測
    1.6 SphK1/2酶活性檢測
    1.7 Sphk1特異性抑制劑DMS預(yù)處理對PMVECs細(xì)胞通透性損傷的保護(hù)作用
    1.8 C C K-8法檢測細(xì)胞活力
    1.9 跨上皮電阻（transepithelial electrical resistance,TEER）及緊密連接蛋白1（zonula occludens-1,ZO-1）、閉合蛋白（occludin）表達(dá)水平測定
    1.1 0 統(tǒng)計學(xué)處理
2 結(jié)果
    2.1 PMVECs的培養(yǎng)及鑒定
    2.2 熱聯(lián)合內(nèi)毒素打擊對PMVECs SphK mRNA、蛋白表達(dá)及酶活性的影響
    2.3 熱聯(lián)合內(nèi)毒素打擊對PMVECs S1PR m R NA和蛋白表達(dá)的影響
    2.4 D M S預(yù)處理對P M V E C s活力及通透性的影響
3 討論


【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]熱打擊對培養(yǎng)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞增殖能力的影響[J]. 耿焱,彭娜,劉亞楠,付煒,雷玉梅,蘇磊.  感染、炎癥、修復(fù). 2013 (01)
[2]膿毒癥血管內(nèi)皮細(xì)胞損傷與微循環(huán)功能障礙[J]. 章志丹,馬曉春.  中國危重病急救醫(yī)學(xué). 2011 (02)
[3]重癥中暑住院病人流行病學(xué)調(diào)查與分析[J]. 蘇磊,郭振輝,錢洪津.  解放軍醫(yī)學(xué)雜志. 2006(09)



本文編號：3152792