目的建立巨噬細(xì)胞RAW264.7和成肌細(xì)胞C2C12共培養(yǎng)體系,檢測該共培養(yǎng)體系下培養(yǎng)不同時長RAW264.7和C2C12間的相互作用。方法 Transwell小室內(nèi)以成肌分化培養(yǎng)基共培養(yǎng)RAW264. 7和C2C12,相差顯微鏡觀察細(xì)胞形態(tài),共培養(yǎng)1、3、5 d后,CCK-8法檢測細(xì)胞增殖能力,Western blot法檢測Myf5、MyoD、myogenin、iNOS和Arg-1蛋白水平,ELISA法檢測培養(yǎng)細(xì)胞上清液IL-1β和IL-10分泌量。結(jié)果①共培養(yǎng)對C2C12的影響:加快成肌分化進程、促進多核肌管形成,與同時間點對照組相比,共培養(yǎng)1 d即抑制Myf5蛋白表達（P<0.05）,增加MyoD（P<0.05）和myogenin（P<0.01）蛋白表達;共培養(yǎng)3 d抑制Myf5蛋白表達（P<0.01）,增加MyoD蛋白表達（P<0.01）;共培養(yǎng)5 d降低細(xì)胞活性（P<0.05）并降低Myf5蛋白表達（P<0.01）,增加肌管面積（P<0.01）。②共培養(yǎng)對RAW264.7的影響:共培養(yǎng)對細(xì)胞形態(tài)無明顯影響,與同時間點對照組相比,... 

【文章來源】：第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報. 2019,41(20)北大核心CSCD

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【部分圖文】：

倒置相差顯微鏡觀察與ＲAW264．7細(xì)胞共培養(yǎng)不同時長對C2C12細(xì)胞形態(tài)的影響100滋m100滋m100滋m100滋m共

100滋m100滋m100滋m100滋m100滋m100滋m100滋m100滋mDay01Day5Day對照組Day3共培養(yǎng)組圖5倒置相差顯微鏡觀察與C2C12細(xì)胞共培養(yǎng)不同時長對ＲAW264．7細(xì)胞形態(tài)的影響2．4共培養(yǎng)不同時長對ＲAW264．7形態(tài)的影響在倒置相差顯微鏡下觀察與C2C12共培養(yǎng)對ＲAW264．7形態(tài)的影響(圖5)。對照組細(xì)胞大小一致，呈圓形，可見少量偽足，隨培養(yǎng)時間延長，細(xì)胞增殖明顯，培養(yǎng)至第5天出現(xiàn)細(xì)胞簇集現(xiàn)象。共培養(yǎng)組細(xì)胞在形態(tài)上相較于同時間點對照組未見明顯差異，但培養(yǎng)至第5天時，細(xì)胞簇集現(xiàn)象較同時間點對照組更加明顯。以上結(jié)果從形態(tài)學(xué)上顯示，與C2C12細(xì)胞共培養(yǎng)時對ＲAW264．7形態(tài)無明顯影響，共培養(yǎng)后期進一步促進ＲAW264．7細(xì)胞增殖。2．5共培養(yǎng)不同時長對ＲAW264．7細(xì)胞增殖的影響CCK-8法檢測結(jié)果顯示，與同時間點對照組相比，共培養(yǎng)5天明顯促進ＲAW264．7細(xì)胞增殖(P＜0．05，圖6)。結(jié)合2．4中形態(tài)學(xué)結(jié)果，進一步說明與C2C12細(xì)胞共培養(yǎng)明顯促進ＲAW264．7細(xì)胞增殖，且存在時間依賴性。150100500對照組共培養(yǎng)組RAW264.7細(xì)胞增殖率/%時間（t/d）Day3Day1Day5aa:P＜0．05，與對照組比較圖6CCK-8法檢測與C2C12細(xì)胞共培養(yǎng)不同時長對ＲAW264．7細(xì)胞增殖的影響2．6共培養(yǎng)不同時長對ＲAW264．7極化標(biāo)志蛋白iNOS和Arg-1的影響Westernblot檢測結(jié)果顯示，與同時間點對照組相比，共培養(yǎng)1、3、5d均顯著抑制M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志蛋白iNOS表達(P＜0．01)，共培養(yǎng)1、3d均顯著增加M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志蛋白Arg-1表達(P＜0．01)(圖7

【參考文獻】：
期刊論文
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