丙型肝炎病毒（Hepatitis C Virus, HCV）是黃病毒家族的肝炎病毒屬,是具有包膜糖蛋白的單股正鏈RNA病毒,感染人肝臟后主要引起慢性感染。全球約有1.7億人口感染HCV,70%的急性感染患者進展為慢性感染,并常進一步發(fā)展為肝纖維化和肝癌。HCV共有6-7個基因型,其中基因型1,2,3在世界范圍內流行,基因型4主要在埃及,基因型5主要在南非,基因型6主要在東南亞,我國流行的HCV主要是1b型和2型。HCV的傳播主要通過非腸道途徑,據WHO統(tǒng)計,僅通過不安全的注射途徑導致的HCV新增感染每年約有2百萬人。迄今為止,HCV尚無有效的疫苗,其治療主要是聚乙二醇化干擾素聯(lián)合利巴韋林的給藥方案。該治療方法價格昂貴,其治療效果與HCV的基因型有一定相關性,并有一定副作用。因此研發(fā)新型的HCV疫苗對于HCV的治療及預防十分迫切和必要。E1和E2包膜糖蛋白對于HCV的進入和感染有重要作用,其存在的豐富N-糖鏈能調節(jié)抗原性和免疫原性。本研究內容主要是通過采用PCR的方法擴增HCV1a型E1E2的基因,用定點突變PCR手段將E1E2基因上特定的N-糖基化位點突變,同時在E1E2的N端和C端同... 

【文章來源】：武漢大學湖北省 211工程院校 985工程院校 教育部直屬院校

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兔抗E2的多克隆抗體的效價檢測10^/mlE2原核蛋白包被ELISA板，免疫前與免疫后的兔E2抗血清按照1:51200到1:400

1E2 N-g!ycosylalion mutants.nts amino acid position,屯represents N-glycans. N-glycan was reith Asp (D) at A^-glycosylation sites (N-X-T/S).化突變體在HeLa細胞，HepG2細胞和293T細胞中均2-M質粒用lipofetamine 2000分別轉染HeLa細胞，進行La細胞48小時后，將細胞用4%多聚甲醒固定后，用細胞中EIE2及其突變株的表達，PI染細胞核。結果1E2-M在HeLa細胞中均有表達，而在pVAX-1空載轉2的表達，如圖5A所示。ElE2-WT和CpG-ElE2-M4的質粒瞬時轉染HepG2細2野生型和突變體糖蛋白與ER的共定位情況，結果進N430位糖基化缺失后，不影響糖蛋白的表達以及與內)。A"■( PI Merer Mil PI Mtrcr

圖6. Western Blot檢測各糖基化突變體在293T細胞中的表達將E1E2-WT以及EIE2-M糖基化突變體的表達質粒轉染293T細胞，48小時后收獲細胞，獲取細胞裂解液，取20 i^g的總蛋白進行Western Blot檢測。Fig.6 Expression of E1E2 N-glycosylation mutants in 293T cells by Western Blot.EIE2-WT and ElE2-M plasmids were transfected into 293T cell. After 48 hours, the cells were


本文編號：3134012