目的:構(gòu)建乙腦/寨卡（JE/ZIKA）嵌合病毒感染性克隆,拯救病毒,并對(duì)嵌合病毒生物學(xué)特征和免疫學(xué)特征進(jìn)行鑒定,以探索該嵌合病毒株是否可以成為寨卡病毒候選疫苗株。方法:用基因克隆技術(shù)把乙腦疫苗株SA14-14-2的prM/E基因用寨卡病毒prM/E基因序列進(jìn)行替換,構(gòu)建JE/ZIKA嵌合病毒感染性克隆,并以其為模板體外轉(zhuǎn)錄得到RNA,將RNA電轉(zhuǎn)染導(dǎo)入BHK21細(xì)胞包裝獲得JE/ZIKA嵌合病毒;采用噬斑法、間接免疫熒光技術(shù)和測(cè)序法鑒定嵌合病毒,并對(duì)嵌合病毒的生長(zhǎng)特性、遺傳穩(wěn)定性和熱穩(wěn)定性進(jìn)行鑒定;用嵌合病毒腦內(nèi)、皮下和腹腔感染清潔級(jí)昆明鼠,測(cè)定嵌合病毒的腦內(nèi)神經(jīng)毒力、皮下神經(jīng)毒力及腹腔神經(jīng)毒力;并用嵌合病毒免疫昆明鼠,噬斑減少中和試驗(yàn)（PRNT）檢測(cè)嵌合病毒產(chǎn)生中和抗體的能力;用不同劑量JE/ZIKA嵌合病毒免疫昆明鼠,2周后用JE/ZIKA腦內(nèi)攻擊,統(tǒng)計(jì)對(duì)昆明鼠的免疫保護(hù)能力;用JE/ZIKA嵌合病毒及JEV SA14-14-2分別免疫昆明鼠,并分別用乙腦野毒株SA14和JE/ZIKA攻擊免疫鼠,統(tǒng)計(jì)病毒間的交叉免疫保護(hù)情況。結(jié)果:酶切實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明成功構(gòu)建JE/ZIKA嵌合病毒感染... 

【文章來(lái)源】：川北醫(yī)學(xué)院四川省

【文章頁(yè)數(shù)】：62 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：碩士

【部分圖文】：

嵌合病毒JE/ZIKA感染性克隆的構(gòu)建Fig1.ConstructionflowchartofinfectioncloneofJE/ZIKAchimericvirus

圖 3 質(zhì)粒 pACNR-F1+F2+F3+F4 的方向鑒定DL2000）；1：pACNR-F1+F2+F3+F4；2：pACNRirectional identification of plasmid pACNR-F1+F2000）；1：pACNR-F1+F2+F3+F4；2：pACNR- 5’端的 pACNR-F1+F2+F3+F4 質(zhì)粒的性內(nèi)切酶 BglII 和 KasI 雙酶切處理后4），獲得 0.4kb、0.7kb、1.1kb 大小毒 JE/ZIKA 全長(zhǎng) cDNA 質(zhì)粒的鑒定性內(nèi)切酶處理后進(jìn)行 1%瓊脂糖凝膠I 和 XhoI 雙酶切后得到 7.5kb 和 5.8kI 雙酶切處理后得 0.3kb、0.4kb、0.6kb

圖 4 質(zhì)粒 pACNR-F1+F2+F3+F4 的酶切鑒定準(zhǔn)（DL2000）；1：pACNR-F1+F2+F3+F4 /BglII+KasI；2：pACM2：DNA 分子量標(biāo)準(zhǔn)（DL15000）estriction endonuclease analysis of plasmid pACNR-F1+F2DL2000）；1：pACNR-F1+F2+F3+F4 /BglII+KasI；2：pACM2：DNA marker（DL15000）

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]乙型腦炎減毒活疫苗SA14-14-2感染性克隆的構(gòu)建、鑒定及穩(wěn)定性分析[J]. 楊健,楊會(huì)強(qiáng),李竹石,林華,趙宇,劉莉,葛永紅,喬代蓉,曹毅,曾獻(xiàn)武,李玉華.  中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志. 2013 (02)
[2]病毒嵌合疫苗的研究進(jìn)展[J]. 莊敏,李迪.  國(guó)外醫(yī)學(xué)(免疫學(xué)分冊(cè)). 2004(03)
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本文編號(hào)：3132553