目的:調(diào)節(jié)CXXC5的表達,明確CXXC5對小鼠肺成纖維細胞（MLFs）的增殖、凋亡作用,以及CXXC5對MLFs分化及CD40/CD40L通路的影響。加入TGF-β1刺激后,調(diào)節(jié)CXXC5的表達,明確CXXC5及TGF-β1對MLFs分化及CD40/CD40L信號通路的共同作用。方法:構(gòu)建腺病毒表達載體:只含熒光蛋白的腺病毒載體（Ad-GFP）、帶有目的基因CXXC5的熒光蛋白腺病毒載體（Ad-CXXC5）、靶向CXXC5的特異性shRNA腺病毒載體（Ad-shR-CXXC5）。將實驗分為8個小組,組織貼壁法培養(yǎng)MLFs,用腺病毒感染各組對數(shù)生長期的細胞,探索最佳MOI值。CCK-8法、流式細胞術(shù)檢測細胞增殖率、凋亡率。ELISA檢測各組細胞培養(yǎng)上清液中Col1aI,Col1aIII,s CD40L的表達。RT-qPCR及Western Bot檢測各組細胞CXXC5,proCol1aI,proCol1aIII,α-SMA,CD40,CD40L mRNA及蛋白的表達。結(jié)果:48小時三種病毒感染MLFs的最佳MOI值均為100。CXXC5表達上調(diào)后,與對照組相比,細胞的增殖活性減低（P&... 

【文章來源】：青島大學山東省

【文章頁數(shù)】：91 頁

【學位級別】：碩士

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圖 3 CXXC5 過表達質(zhì)粒測序圖 3：對構(gòu)建的 CXXC5 過表達質(zhì)粒進行測序，將測序結(jié)果與 CXXC5 基因片段進行對比，證實構(gòu)建的質(zhì)粒正確。上方為堿基序列，下方紅、黑、綠、藍測序峰分別代表 T、G、A、C 堿基。（2）CXXC5過表達質(zhì)粒構(gòu)圖。CXXC5

1.1 CXXC5 過表達質(zhì)粒測序及構(gòu)圖。（1）CXXC5 過表達質(zhì)粒測序結(jié)果圖 3 CXXC5 過表達質(zhì)粒測序圖 3：對構(gòu)建的 CXXC5 過表達質(zhì)粒進行測序，將測序結(jié)果與 CXXC5 基因片段進建的質(zhì)粒正確。上方為堿基序列，下方紅、黑、綠、藍測序峰分別代表 T、G、（2）CXXC5過表達質(zhì)粒構(gòu)圖。


本文編號：3122000