目的探討Wnt/β-catenin信號通路在小鼠胚胎干細(xì)胞向胰島素分泌細(xì)胞定向分化過程中的功能。方法在小鼠胚胎干細(xì)胞向胰島素分泌細(xì)胞分化過程中的三個不同階段分別添加Wnt/β-catenin信號通路的激動劑CHIR99021;利用Western blot、qPCR以及免疫熒光等方法,檢測胰島細(xì)胞標(biāo)志基因Pdx1、Ngn3、Pax4和Insulin1的表達(dá)情況;基于Tet-On表達(dá)調(diào)控系統(tǒng),建立由小分子Doxcycline控制的β-catenin基因可誘導(dǎo)過表達(dá)胚胎干細(xì)胞系,在胰島細(xì)胞形成的不同階段進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá),觀察其功能是否與CHIR99021類似;最后,利用慢病毒干擾系統(tǒng),在干細(xì)胞中下調(diào)β-catenin的表達(dá)水平,觀察其是否可以減弱CHIR99021在胰島細(xì)胞形成過程中的功能。結(jié)果小鼠胚胎干細(xì)胞在三個不同時間段經(jīng)過三種不同配方的溶液處理能夠有效地分化成胰島細(xì)胞。在胰島細(xì)胞定向分化的早期和晚期階段,添加CHIR99021和過表達(dá)β-catenin均可以提高胚胎干細(xì)胞向胰島素分泌細(xì)胞的分化效率,表現(xiàn)為Pdx1和Insulin 1的表達(dá)上調(diào)（P<0.01）,而干擾β-catenin... 

【文章來源】：安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報. 2019,54(12)北大核心

【文章頁數(shù)】：8 頁

【部分圖文】：

mESCs分化為胰島細(xì)胞

CHIR在胰島細(xì)胞定向分化中的作用

糖尿病一直沒有特效的治療方法,尋找替代材料和療法現(xiàn)已成為臨床上亟待解決的重大問題之一。本項目研究建立并優(yōu)化了目前胚胎干細(xì)胞向胰島素分泌細(xì)胞的分化方法,表明在胚胎干細(xì)胞向胰島細(xì)胞分化的早期和晚期,用小分子CHIR處理可以有效地誘導(dǎo)胰島細(xì)胞的生成效率。因為GSK-3抑制很多蛋白的活性,從而調(diào)控多個信號通路[7],所以接下來通過調(diào)控β-catenin基因的表達(dá)來確定CHIR確實通過Wnt/β-catenin信號發(fā)揮功能。結(jié)果表明過表達(dá)β-catenin能夠模擬CHIR的作用,從而促進(jìn)小鼠胚胎干細(xì)胞向胰島細(xì)胞分化,而下調(diào)β-catenin基因的表達(dá)則會削弱CHIR的功能。因此,激活Wnt/β-catenin信號通路對于高質(zhì)量胰島素分泌細(xì)胞的高效產(chǎn)生具有促進(jìn)作用。圖4 β-catenin介導(dǎo)CHIR誘導(dǎo)mESCs向胰島細(xì)胞分化的作用


本文編號：3117239