MicroRNAs （miRNAs）已經發(fā)現(xiàn)在卵巢卵泡發(fā)育過程中起著關鍵作用。但是,關于哺乳動物卵巢中miRNA基因自身的表達調控還知之甚少。本實驗室之前報道m(xù)iR-224通過靶向Smad4參與轉化生長因子-β1（TGF-β1）介導的卵泡顆粒細胞生長和雌二醇生成。本研究中,miR-224在顆粒細胞中表達的轉錄調控被進一步研究。我們的結果顯示抑癌基因p53和NF-κB家族p65抑制TGF-β1誘導的pri-miR-224在顆粒細胞中的表達。核質分離和染色質免疫共沉淀實驗證實TGF-β1能夠誘導p53和p65由胞質向胞核轉移和促進p53和p65結合在GABAA受體ε亞基（GABRE）（miR-224宿主基因）近端啟動子區(qū)域上。p53和p65協(xié)同轉錄抑制GABRE啟動子活性。進一步實驗發(fā)現(xiàn)顆粒細胞中p53和p65可以通過抑制下游miR-224來上調SMAD4表達,這至少部分影響了miR-224和SMAD4對于顆粒細胞增殖和雌二醇分泌的效應。另外,本實驗室之前的研究顯示miR-224靶向于在排卵過程中對與卵丘擴展非常關鍵的基因正五聚蛋白3（Ptx3）, TGF-β1可以促進小鼠卵巢壁顆粒細胞和... 

【文章來源】：中國科學技術大學安徽省 211工程院校 985工程院校

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【學位級別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 雌性生殖概述
        1.1.1 雌性生殖系統(tǒng)
        1.1.2 卵泡發(fā)育
    1.2 MiRNAs與雌性生殖
        1.2.1 MiRNAs生成和調控機制
        1.2.2 MiRNAs對雌性生殖調控
第二章 研究工作與結果討論
    2.1 p53和NF-κB p65協(xié)同調控小鼠卵巢腔前顆粒細胞miR-224轉錄
        2.1.1 引言
        2.1.2 研究結果
            2.1.2.1 p53和p65抑制miR-224宿主基因（GABRE）啟動子活性
            2.1.2.2 腔前顆粒細胞（mpGCs）中p53和p65在轉錄水平上調控miR-224表達
            2.1.2.3 p53-p65相互作用影響miR-224宿主基因（GABRE）啟動子活性
            2.1.2.4 p53和p65通過miR-224介導的靶基因Smad4途徑影響腔前顆粒細胞增殖和雌二醇（E2）分泌
        2.1.3 結果分析與討論
        2.1.4 本節(jié)小結
    2.2 MiR-224通過靶向Ptx3調控小鼠卵丘擴展
        2.2.1 引言
        2.2.2 研究結果
            2.2.2.1 卵泡發(fā)育中TGF-β1,miR-224和PTX3表達
                2.2.2.2 MiR-224抑制小鼠卵丘擴展
                2.2.2.3 MiR-224抑制小鼠排卵
        2.2.3 結果分析與討論
        2.2.4 本節(jié)小結
第三章 實驗材料與方法
    3.1 實驗動物
    3.2 實驗試劑與寡核苷酸序列
    3.3 生物信息學分析
    3.4 基因組DNA抽提
    3.5 質粒構建與轉化
    3.6 卵泡分離
    3.7 細胞分離和培養(yǎng)
    3.8 細胞轉染和熒光素酶活性分析（Luciferase activity assay）
    3.9 RNA抽提和反轉錄PCR（RT-PCR）
    3.10 實時定量PCR（Real-time PCR）
    3.11 免疫印跡（Western blotting）
    3.12 細胞核質蛋白分離
    3.13 染色質免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation,ChIP）和sequential ChIP（re-ChIP）
    3.14 免疫共沉淀（Immunoprecipitation assay）
    3.15 細胞增殖檢測和激素檢測
    3.16 酶聯(lián)免疫吸附實驗（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）
    3.17 腺病毒準備
    3.18 COC分離和感染
    3.19 腺病毒卵巢囊內注射
    3.20 統(tǒng)計分析
參考文獻
所獲獎勵和參加學術會議情況
致謝
攻讀博士學位期間發(fā)表的學術論文


【參考文獻】：
博士論文
[1]MiRNA-224參與小鼠卵泡發(fā)育調控作用的研究[D]. 姚桂東.中國科學技術大學 2011



本文編號：3107490