MicroRNAs （miRNAs）已經(jīng)發(fā)現(xiàn)在卵巢卵泡發(fā)育過(guò)程中起著關(guān)鍵作用。但是,關(guān)于哺乳動(dòng)物卵巢中miRNA基因自身的表達(dá)調(diào)控還知之甚少。本實(shí)驗(yàn)室之前報(bào)道m(xù)iR-224通過(guò)靶向Smad4參與轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子-β1（TGF-β1）介導(dǎo)的卵泡顆粒細(xì)胞生長(zhǎng)和雌二醇生成。本研究中,miR-224在顆粒細(xì)胞中表達(dá)的轉(zhuǎn)錄調(diào)控被進(jìn)一步研究。我們的結(jié)果顯示抑癌基因p53和NF-κB家族p65抑制TGF-β1誘導(dǎo)的pri-miR-224在顆粒細(xì)胞中的表達(dá)。核質(zhì)分離和染色質(zhì)免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)TGF-β1能夠誘導(dǎo)p53和p65由胞質(zhì)向胞核轉(zhuǎn)移和促進(jìn)p53和p65結(jié)合在GABAA受體ε亞基（GABRE）（miR-224宿主基因）近端啟動(dòng)子區(qū)域上。p53和p65協(xié)同轉(zhuǎn)錄抑制GABRE啟動(dòng)子活性。進(jìn)一步實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)顆粒細(xì)胞中p53和p65可以通過(guò)抑制下游miR-224來(lái)上調(diào)SMAD4表達(dá),這至少部分影響了miR-224和SMAD4對(duì)于顆粒細(xì)胞增殖和雌二醇分泌的效應(yīng)。另外,本實(shí)驗(yàn)室之前的研究顯示miR-224靶向于在排卵過(guò)程中對(duì)與卵丘擴(kuò)展非常關(guān)鍵的基因正五聚蛋白3（Ptx3）, TGF-β1可以促進(jìn)小鼠卵巢壁顆粒細(xì)胞和... 

【文章來(lái)源】：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)安徽省 211工程院校 985工程院校

【文章頁(yè)數(shù)】：96 頁(yè)

【學(xué)位級(jí)別】：博士

【文章目錄】：
摘要
ABSTRACT
第一章 緒論
    1.1 雌性生殖概述
        1.1.1 雌性生殖系統(tǒng)
        1.1.2 卵泡發(fā)育
    1.2 MiRNAs與雌性生殖
        1.2.1 MiRNAs生成和調(diào)控機(jī)制
        1.2.2 MiRNAs對(duì)雌性生殖調(diào)控
第二章 研究工作與結(jié)果討論
    2.1 p53和NF-κB p65協(xié)同調(diào)控小鼠卵巢腔前顆粒細(xì)胞miR-224轉(zhuǎn)錄
        2.1.1 引言
        2.1.2 研究結(jié)果
            2.1.2.1 p53和p65抑制miR-224宿主基因（GABRE）啟動(dòng)子活性
            2.1.2.2 腔前顆粒細(xì)胞（mpGCs）中p53和p65在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控miR-224表達(dá)
            2.1.2.3 p53-p65相互作用影響miR-224宿主基因（GABRE）啟動(dòng)子活性
            2.1.2.4 p53和p65通過(guò)miR-224介導(dǎo)的靶基因Smad4途徑影響腔前顆粒細(xì)胞增殖和雌二醇（E2）分泌
        2.1.3 結(jié)果分析與討論
        2.1.4 本節(jié)小結(jié)
    2.2 MiR-224通過(guò)靶向Ptx3調(diào)控小鼠卵丘擴(kuò)展
        2.2.1 引言
        2.2.2 研究結(jié)果
            2.2.2.1 卵泡發(fā)育中TGF-β1,miR-224和PTX3表達(dá)
                2.2.2.2 MiR-224抑制小鼠卵丘擴(kuò)展
                2.2.2.3 MiR-224抑制小鼠排卵
        2.2.3 結(jié)果分析與討論
        2.2.4 本節(jié)小結(jié)
第三章 實(shí)驗(yàn)材料與方法
    3.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物
    3.2 實(shí)驗(yàn)試劑與寡核苷酸序列
    3.3 生物信息學(xué)分析
    3.4 基因組DNA抽提
    3.5 質(zhì)粒構(gòu)建與轉(zhuǎn)化
    3.6 卵泡分離
    3.7 細(xì)胞分離和培養(yǎng)
    3.8 細(xì)胞轉(zhuǎn)染和熒光素酶活性分析（Luciferase activity assay）
    3.9 RNA抽提和反轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）
    3.10 實(shí)時(shí)定量PCR（Real-time PCR）
    3.11 免疫印跡（Western blotting）
    3.12 細(xì)胞核質(zhì)蛋白分離
    3.13 染色質(zhì)免疫共沉淀（Chromatin immunoprecipitation,ChIP）和sequential ChIP（re-ChIP）
    3.14 免疫共沉淀（Immunoprecipitation assay）
    3.15 細(xì)胞增殖檢測(cè)和激素檢測(cè)
    3.16 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)（Enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA）
    3.17 腺病毒準(zhǔn)備
    3.18 COC分離和感染
    3.19 腺病毒卵巢囊內(nèi)注射
    3.20 統(tǒng)計(jì)分析
參考文獻(xiàn)
所獲獎(jiǎng)勵(lì)和參加學(xué)術(shù)會(huì)議情況
致謝
攻讀博士學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文


【參考文獻(xiàn)】：
博士論文
[1]MiRNA-224參與小鼠卵泡發(fā)育調(diào)控作用的研究[D]. 姚桂東.中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué) 2011



本文編號(hào)：3107490