目的:乙肝病毒（hepatitis B virus,HBV）感染是全世界的重大健康問題,可引起慢性肝炎、肝硬化、肝纖維化等嚴重的肝臟疾病,并是肝細胞癌的重要危險因素,據(jù)報道HBV在病毒相關(guān)的肝細胞癌中約占80%。HBV是一種小的有包膜的嗜肝DNA病毒,基因組為部分雙鏈、松弛閉合的環(huán)狀DNA,但其復(fù)制過程中有RNA逆轉(zhuǎn)錄病毒的特性,其編碼的HBV DNA聚合酶（HBV DNA Pol）具有逆轉(zhuǎn)錄酶活性,能夠識別并結(jié)合HBV前基因組RNA（pgRNA）的ε元件啟動HBV基因組的復(fù)制,并與pgRNA形成復(fù)合體包裝進入核衣殼,催化pgRNA逆轉(zhuǎn)錄為DNA;同時具有DNA聚合酶活性,完成HBV DNA雙鏈的形成,在HBV復(fù)制中發(fā)揮重要作用。因此對于HBV DNA Pol的調(diào)控研究有助于深入了解HBV復(fù)制過程。三重基序蛋白（Tripartite motif protein,TRIM）家族具有三個保守的結(jié)構(gòu)域（RING環(huán)、B-box盒和卷曲螺旋結(jié)構(gòu)域）,此外還有一個可變的C末端。該家族成員參與細胞分化、增殖、發(fā)育、凋亡等多種生物學(xué)過程,近年來的研究表明一些TRIM蛋白具有抗病毒的功能,特別是對逆轉(zhuǎn)錄... 

【文章來源】：天津醫(yī)科大學(xué)天津市 211工程院校

【文章頁數(shù)】：80 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

HBVDNAPol相互作用蛋白的篩選

IM21 的內(nèi)源性相互作用（圖 1-2A）及外源性相互作用（圖1-2B）。此外我們用 HA 抗體免疫沉淀細胞內(nèi)的 TRIM21 及其相互作用蛋白，用Flag 抗體可檢測到 HBV DNA Pol 的表達（圖 1-2C），進一步驗證了兩者之間的

圖 1-3：HBV DNAPol 與 TRIM21 在 Huh7 細胞中的共定位。用 Flag 融合的 HBV DNAPol 和 HA 融合的 TRIM21 表達質(zhì)粒瞬時轉(zhuǎn)染 Huh7 細胞，3h 后進行免疫熒光實驗分析，用鼠抗 Flag 單克隆抗體及兔抗 HA 多克隆抗體作為探針，并用 FITC 標記的抗兔二抗和 TRITC 標記的抗鼠二抗對細胞進行染色，DAPI 染料用于細胞核的染色，共聚焦顯微鏡圖像采集并分析。比例尺為 20 μm。1.3 小結(jié)1. 我們采用免疫共沉淀結(jié)合銀染及質(zhì)譜分析確定 HBV DNA Pol 的相互作用蛋白，并選取 TRIM21 作為本課題的研究對象。2. 免疫共沉淀實驗證實了 HBV DNA Pol 與 TRIM21 之間的相互作用。3. 免疫熒光結(jié)合共聚焦顯微鏡圖像采集技術(shù)證實了 HBV DNA Pol 與 TRIM2在細胞質(zhì)中的共定位。

【參考文獻】：
期刊論文
[1]Hepatitis B virus replication[J]. Juergen Beck,Michael Nassal.  World Journal of Gastroenterology. 2007(01)



本文編號：3092360