目的:對結晶樣視網(wǎng)膜變性（Bietti crystalline dystrophy,BCD）小鼠模型的表型進行鑒定,對該小鼠模型進行自然病程的觀察并進行血液脂代謝組學的分析,并探索影響疾病發(fā)生發(fā)展的可能機制和評估該小鼠模型是否可作為合適的臨床前治療研究模型。方法:通過CRISPR/Cas9基因編輯技術構建Cyp4v3-/-的小鼠,并進行大量繁殖。首先對其進行視網(wǎng)膜免疫熒光的蛋白表達鑒定。Cyp4v3-/-結晶樣視網(wǎng)膜變性小鼠分成兩組,一組飼喂高脂飼料,一組飼喂普通飼料。C57BL/6J小鼠作為正常對照。對三組小鼠每4周進行眼底彩色照相,光學相干斷層掃描（optical coherence tomography,OCT）,眼底自發(fā)熒光成像,視網(wǎng)膜電流圖（electroretinogram,ERG）等檢查,觀察至20周。另外將C57BL/6J小鼠高脂飼喂8周,檢查其眼底和進行ERG的檢測。處死相同周齡的Cyp4v3-小鼠和野生型小鼠,取下其眼球,進行視網(wǎng)膜的切片以及HE染色和透射電鏡觀察。采集Cyp4v3-/-小鼠,野生型小鼠的血液,采用超高效液相色譜-質譜法進行非靶向脂代謝組學分析。結果... 

【文章來源】：北京協(xié)和醫(yī)學院北京市 211工程院校 985工程院校

【文章頁數(shù)】：70 頁

【學位級別】：碩士

【部分圖文】：

圖２．?Ａ．在Ｃ沖基因上下游各設計的一個ｓｇＲＮＡ圖Ｂ．兩個ｓｇＲＮＡ在小鼠胚胎內實際產(chǎn)生的??．

取相同周齡的Ｃ５７ＢＬ／６Ｊ小鼠和ＶＪ、鼠的視網(wǎng)膜進行眼球冰凍切片和??免疫熒光染色，檢測ＣＹＰ４Ｖ３蛋白的表達。結果顯示ＷＴ小鼠ＲＰＥ層可檢測到??ＣＹＰ４Ｖ３蛋白的表達，而同齡小鼠則不表達（圖３）。??Ｃｙｐ４ｖ３?ＤＡＰＩ?合并??■■■??圖３．熒光顯微鏡下觀察ＣＹＰ４Ｖ３蛋白表達，上圖中ＷＴ小鼠視網(wǎng)膜ＲＰＥ層ＣＹＰ４Ｖ３的表達呈紅色??熒光

３．?３小鼠眼底彩照，ＯＣＴ和自發(fā)熒光??１．通過２０周的觀察發(fā)現(xiàn)，與Ｃ組野生型正常小鼠相比，Ａ組和Ｂ組的部??分小鼠眼底會出現(xiàn)黃色大片狀病灶（圖４），病灶可以出現(xiàn)在視網(wǎng)膜的??任何部位，且形態(tài)各異，而且數(shù)量不等，有的小鼠多，有的小鼠少，甚至有的小??鼠完全沒有，ＯＣＴ上視網(wǎng)膜外層有高信號的顆粒物質堆積，顆粒物質似從ＲＰＥ層??出現(xiàn)，可向內累及至內核層，中間可形成空泡，病灶較輕者可僅有ＲＰＥ層及橢圓??體帶的不連續(xù)及突起（圖４）。??ｒ?ｉ??圖４－１．?Ａ組小鼠眼底彩照及ＯＣＴ左圖：視網(wǎng)膜周邊多處黃色病灶右圖：病灶處視網(wǎng)膜外層有??高信號的顆粒物質堆積，中間可形成空泡??圖４－２．?Ｂ組小鼠眼底彩照及ＯＣＴ左圖：視網(wǎng)膜周邊黃色病灶右圖：病灶處視網(wǎng)膜外層ＲＰＥ層??及橢圓體帶的不連續(xù)及突起??１７??

【參考文獻】：
期刊論文
[1]結晶樣視網(wǎng)膜色素變性患者血脂濃度的變化[J]. 李孟達,殷曉貝,何婷,孫曉偉,李根林.  中華實驗眼科雜志. 2015 (01)

博士論文
[1]結晶樣視網(wǎng)膜變性及常染色體顯性遺傳性視神經(jīng)萎縮的臨床與基礎研究[D]. 李華晉.北京協(xié)和醫(yī)學院 2017



本文編號：3088741